【摘 要】
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目的:观察低氧诱导因子-1 α(Hypoxia inducible factor-1 α,HIF-1α)在化学诱导的低氧状态下培养的原代鼠胚成骨细胞中的表达变化,并初步探讨其与细胞调亡之间的关系.方法:
【机 构】
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大庆龙南医院骨科四病区,黑龙江大庆,163453大连医科大学附属第一医院骨科;
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目的:观察低氧诱导因子-1 α(Hypoxia inducible factor-1 α,HIF-1α)在化学诱导的低氧状态下培养的原代鼠胚成骨细胞中的表达变化,并初步探讨其与细胞调亡之间的关系.方法:采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测低氧和常氧培养不同时间的成骨细胞HIF-1α以及参与细胞调亡的关键基因Caspase-3与Bcl-2的表达变化.应用免疫印迹(Western-blotting)方法分别检测了低氧和常氧培养下成骨细胞Caspase-3和bcl -2蛋白的表达情况.结果:反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测各基因的表达变化:经氯化钴处理后,HIF-1 α和Caspase-3mRNA的表达随时间的延长逐渐增加(P＜0.01),除第0天外,均高于常氧组(P＜0.01),而常氧组各时间段则无明显变化(P＞0.05);Bcl-2 mRNA表达与前两者相反,随时间的延长呈逐渐降低(P＜0.01),除第0天外,均低于常氧组(P＜0.01),常氧组各时间段则无明显变化(P＞0.05).免疫印迹(Western-blotting)检测各蛋白的表达变化:通过ECL(enhanced chemi luminescence)显色观察结果并经Lab-work软件分析可见,经氯化钴处理后,Caspase-3蛋白的表达逐渐增加(P＜0.01),除第0天外,均高于常氧组(P＜0.01),而常氧组各时间段则无明显变化(P＞ 0.05); Bcl-2蛋白表达与前者相反,呈逐渐降低(P＜0.01),除第0天外,均低于常氧组(P＜0.01),常氧组各时间段则无明显变化(P＞ 0.05).结论:氯化钴可以化学模拟低氧状态,使成骨细胞表达大量的HIF-1α. HIF-1 α可能通过调节Caspase-3和Bcl-2的表达而促进成骨细胞凋亡,且这种促进作用与缺氧的时间有关.
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