【摘 要】
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目的:监测溶瘤病毒M1在组织中的传播情况,以更好地控制给药剂量,确保安全性.方法:建立一种基于TaqMan的实时定量PCR检测法,用于对组织中溶瘤病毒M1的检测和定量,并检测静脉注
【机 构】
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中山大学中山医学院药理学教研室,广东广州,510080
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目的:监测溶瘤病毒M1在组织中的传播情况,以更好地控制给药剂量,确保安全性.方法:建立一种基于TaqMan的实时定量PCR检测法,用于对组织中溶瘤病毒M1的检测和定量,并检测静脉注射病毒后多种实验动物体内的病毒载量和分布.结果:我们以一对特异的引物(Q3)和标准RNA开始SYBR Green RT-qPCR研究.通过优化实验方法发现当退火温度高于62℃时可降低基质效应,但却影响了扩增效率.因此我们建立了一步法TaqMan RT-qPCR实验,重新设计了一对Q3短引物(Q3S).运用一步TaqMan RT-qPCR检测法和Q3S引物,在混有SD大鼠或食蟹猴基质RNA的背景下,均能特异性检测到低拷贝数的标准RNA.经验证,该方法适用于检测M1病毒在小鼠、SD大鼠和食蟹猴体内的组织分布.结论:利用Q3S引物构建的TaqMan一步法RT-qPCR能够定量检测不同动物不同组织样品中的M1病毒,具有特异性和敏感性,可进一步应用于临床样品的检测.
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