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〔摘要〕目的探讨几种色谱法在中药鉴定研究中的应用。方法查阅相关文献,分析色谱法在中药鉴定中的应用,分析各种色谱法在中药鉴定中的优越性。结果高效液相色谱(HPLC)主要用于分离分析中药组分含量,薄层色谱(TLC)和高速逆流色谱(HSCCC)主要用于多组分分离。结论高效液相与其它色谱联用在测定指纹图谱方向卓有成效。
〔关键词〕色谱;中药鉴定
〔中图分类号〕R282〔文献标识码〕A〔文章编号〕1009-6019-(2010)04-40-02
色谱法又称色谱分析法、层析法,起源于20世纪初,是一种分离和分析方法,广泛应用于各个领域,尤其在药物的研究领域显示出独特的优越性。常用的色谱有高效液相色谱(HPLC)、薄层色谱(TLC)、气质联用色谱(GC-MS)、反相HPLC、高速逆流色谱(HSCCC)等,现就其在中药研究领域的应用探讨如下。
1中药分离鉴定研究
中药化学成分的复杂性和多样性,致使性质差异、生物活性不同。近年来,研究人员利用色谱技术对中药分离制备,药理作用明显增强。洪波等〔1〕采用高速逆流色谱(HSCCC)法,以氯仿-甲醇-0.3mol/L盐酸(4∶3∶2)为溶液系统,从附子中分离得到了15-α-羟基新乌碱单体;俞雁等〔2〕应用HSCCC技术,采用一次进柱过程从延胡索粗提取物中分离制备活性成分延胡索乙素。康纯等〔3〕利用微乳薄层色谱对黄酮类的槐米、黄芩等7种中药材及中药饮片、复方芦丁片、双黄连口服液等7种中成药进行分离鉴定,得到理想效果。
2中药质量控制研究
2.1中药有效成分测定
中药的有效成成及含量影响药物的吸收代谢。高效液相色谱-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)可以全面控制中药中整体物质群,真实反映中药内在化学成分。曹进等〔4〕运用HPLC-ELSD对复方清开灵注射液其中7种有效成分定量测定,方法学考察结果良好。张皓冰等〔5〕采用气相色谱-质谱(GC-MS)联用技术对多组分低级性、小分子量、具挥发性的麝香的含量测定,测定范围内有较好的线性关系和回收率,特征碎片定量有较好选择性,能准确进行含量测定。此外,孙冬梅等〔6〕采用高效液相色谱(HPLC)测定不同产地陈皮药材中橙皮苷的含量,为评价陈皮药材质量提供依据,并为制成合格的陈皮配方颗粒提供依据。
2.2中药有效部位确定
中药有效部位,是指当一味中药或复方中药提取物中的一类或几类化学成分的含量达到总提取物的50%以上,而且一类或几类已知化学成分被认为是有效成分,该类或几类成分的混合体即被认为是有效部位。中药有效部位只是用化学方法进行含量测定得到的一个结果。近年来,许多医药研究者就中药有效部位的某种化学成分研究分析、鉴定。胡亚楠等〔7〕建立了高效液相色谱测定脑脉通有效部位中阿魏酸含量的方法,阿魏酸平均回收率为99.2%,RSD为2.08%。李军等〔8〕利用HPLC法测定甜叶菊有效部位中4个酚类成分含量,4个化合物平均加样回收率(n=3)均在98.69%-100.9%之间,且RSD均小于3%,此法的实践为甜叶菊有效部位质量标准的建立提供科学依据。
2.3中药指纹图谱确定
我国中药质量标准通常是利用色谱或光谱手段鉴别和测定一种或几种有效成分、活性成分、指标成分,或药典规定的常规检查项目,但这些方法还有局限性,结合指纹图谱,能够反映化学成分全貌。高效液相色谱-质谱联用技术将HPLC对复杂样品高分离能力与质谱具有高效选择性、高灵敏度以及专属性结合起来,有效的提高中药鉴定的准确率。韩凤梅等〔9〕研究山麦冬甲醇提取物中物质组成情况,建立了山麦冬HPLC-ESI-MS特征指纹图谱,其中山麦冬提取物色谱图中17个共有峰的重现性与精密度RSD<5%,可用于山麦冬的品质评价与品种鉴别。另外,有报道称有研究者应用HPLC-DAD法测定10批太子参药材的色谱图,有效分离了7个共有峰,确立太子参的标准指纹图谱,为太子参药材的质量控制提供依据。
3结语
高效液相色谱具有高效、高灵敏度、应用范围广、分析速度快、载液流速快等特点,在中药主要用于分离分析药物组分含量、药物动力学研究、指纹图谱确定等方面;高速逆流色谱主要用于中药的分离制备单体;薄层色谱是快速分离和定性分析少量物质的一种很重要的实验技术,适用于少量样品(几到几微克,甚至0.01微克)的分离;高效薄层色谱能进行定性和定量分析,假相薄层色谱能够用于药物微量物质的检查和体内药物分析,另外,微乳薄层色谱常用于中成药的分离和鉴定;高效液相色谱与其它色谱联用绘制测定指纹图谱,为中药快速发展提供了科学支撑。
4参考文献
1洪波,司云珊,赵宏峰,等.高速逆流色谱法分离附子中的15-α-羟基新乌碱〔J〕.吉林农业大学学报,2004,26(1):57-58,65.
2俞雁,金艳,徐超,等.应用高速逆流色谱技术从延胡索中分离制备延胡索乙素〔J〕.世界科学技术-中医药现代化•基础研究,2006,8(2):331-333.
3林辉概,戈早川,李志良,等.表面活性剂用于黄酮药物的薄层色谱分离鉴定的研究〔J〕.药学学报,1991,26(6):471.
4曹进,徐燕,张永知,等.清开灵注射液HPLC/ELSD指纹图谱建立及质量相关性研究〔J〕.分析化学,2004,32(4):469.
5张皓冰,陶奕,洪筱坤,等.气相色谱/质谱(GC/MS)联用测定麝香中甾体成分的研究〔J〕.中成药,2005,27(1):79-83.
6孙冬梅,毕晓黎,胥爱丽,等.HPLC法测定不同产地陈皮药材中橙皮苷的含量〔J〕.中国实验方剂学杂志,2009,15(11):1-3.
7胡亚楠,冯素香,王淑美,等.脑脉通有效部位中阿魏酸的含量测定〔J〕.河南中医学院学报,2008,23(137):34-5.
8李军,姜华,石仁兵.HPLC测定甜叶菊有效部位中4个酚类成分含量〔J〕.药物分析杂志,2009,29(4):536-539.
9韩凤梅,李紫,蔡敏,等.山麦冬的HPLC-ESI-MS特征指纹图谱研究〔J〕.中草药,2005,36(9):1395.
〔收稿日期:2010-04-17〕
〔关键词〕色谱;中药鉴定
〔中图分类号〕R282〔文献标识码〕A〔文章编号〕1009-6019-(2010)04-40-02
色谱法又称色谱分析法、层析法,起源于20世纪初,是一种分离和分析方法,广泛应用于各个领域,尤其在药物的研究领域显示出独特的优越性。常用的色谱有高效液相色谱(HPLC)、薄层色谱(TLC)、气质联用色谱(GC-MS)、反相HPLC、高速逆流色谱(HSCCC)等,现就其在中药研究领域的应用探讨如下。
1中药分离鉴定研究
中药化学成分的复杂性和多样性,致使性质差异、生物活性不同。近年来,研究人员利用色谱技术对中药分离制备,药理作用明显增强。洪波等〔1〕采用高速逆流色谱(HSCCC)法,以氯仿-甲醇-0.3mol/L盐酸(4∶3∶2)为溶液系统,从附子中分离得到了15-α-羟基新乌碱单体;俞雁等〔2〕应用HSCCC技术,采用一次进柱过程从延胡索粗提取物中分离制备活性成分延胡索乙素。康纯等〔3〕利用微乳薄层色谱对黄酮类的槐米、黄芩等7种中药材及中药饮片、复方芦丁片、双黄连口服液等7种中成药进行分离鉴定,得到理想效果。
2中药质量控制研究
2.1中药有效成分测定
中药的有效成成及含量影响药物的吸收代谢。高效液相色谱-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)可以全面控制中药中整体物质群,真实反映中药内在化学成分。曹进等〔4〕运用HPLC-ELSD对复方清开灵注射液其中7种有效成分定量测定,方法学考察结果良好。张皓冰等〔5〕采用气相色谱-质谱(GC-MS)联用技术对多组分低级性、小分子量、具挥发性的麝香的含量测定,测定范围内有较好的线性关系和回收率,特征碎片定量有较好选择性,能准确进行含量测定。此外,孙冬梅等〔6〕采用高效液相色谱(HPLC)测定不同产地陈皮药材中橙皮苷的含量,为评价陈皮药材质量提供依据,并为制成合格的陈皮配方颗粒提供依据。
2.2中药有效部位确定
中药有效部位,是指当一味中药或复方中药提取物中的一类或几类化学成分的含量达到总提取物的50%以上,而且一类或几类已知化学成分被认为是有效成分,该类或几类成分的混合体即被认为是有效部位。中药有效部位只是用化学方法进行含量测定得到的一个结果。近年来,许多医药研究者就中药有效部位的某种化学成分研究分析、鉴定。胡亚楠等〔7〕建立了高效液相色谱测定脑脉通有效部位中阿魏酸含量的方法,阿魏酸平均回收率为99.2%,RSD为2.08%。李军等〔8〕利用HPLC法测定甜叶菊有效部位中4个酚类成分含量,4个化合物平均加样回收率(n=3)均在98.69%-100.9%之间,且RSD均小于3%,此法的实践为甜叶菊有效部位质量标准的建立提供科学依据。
2.3中药指纹图谱确定
我国中药质量标准通常是利用色谱或光谱手段鉴别和测定一种或几种有效成分、活性成分、指标成分,或药典规定的常规检查项目,但这些方法还有局限性,结合指纹图谱,能够反映化学成分全貌。高效液相色谱-质谱联用技术将HPLC对复杂样品高分离能力与质谱具有高效选择性、高灵敏度以及专属性结合起来,有效的提高中药鉴定的准确率。韩凤梅等〔9〕研究山麦冬甲醇提取物中物质组成情况,建立了山麦冬HPLC-ESI-MS特征指纹图谱,其中山麦冬提取物色谱图中17个共有峰的重现性与精密度RSD<5%,可用于山麦冬的品质评价与品种鉴别。另外,有报道称有研究者应用HPLC-DAD法测定10批太子参药材的色谱图,有效分离了7个共有峰,确立太子参的标准指纹图谱,为太子参药材的质量控制提供依据。
3结语
高效液相色谱具有高效、高灵敏度、应用范围广、分析速度快、载液流速快等特点,在中药主要用于分离分析药物组分含量、药物动力学研究、指纹图谱确定等方面;高速逆流色谱主要用于中药的分离制备单体;薄层色谱是快速分离和定性分析少量物质的一种很重要的实验技术,适用于少量样品(几到几微克,甚至0.01微克)的分离;高效薄层色谱能进行定性和定量分析,假相薄层色谱能够用于药物微量物质的检查和体内药物分析,另外,微乳薄层色谱常用于中成药的分离和鉴定;高效液相色谱与其它色谱联用绘制测定指纹图谱,为中药快速发展提供了科学支撑。
4参考文献
1洪波,司云珊,赵宏峰,等.高速逆流色谱法分离附子中的15-α-羟基新乌碱〔J〕.吉林农业大学学报,2004,26(1):57-58,65.
2俞雁,金艳,徐超,等.应用高速逆流色谱技术从延胡索中分离制备延胡索乙素〔J〕.世界科学技术-中医药现代化•基础研究,2006,8(2):331-333.
3林辉概,戈早川,李志良,等.表面活性剂用于黄酮药物的薄层色谱分离鉴定的研究〔J〕.药学学报,1991,26(6):471.
4曹进,徐燕,张永知,等.清开灵注射液HPLC/ELSD指纹图谱建立及质量相关性研究〔J〕.分析化学,2004,32(4):469.
5张皓冰,陶奕,洪筱坤,等.气相色谱/质谱(GC/MS)联用测定麝香中甾体成分的研究〔J〕.中成药,2005,27(1):79-83.
6孙冬梅,毕晓黎,胥爱丽,等.HPLC法测定不同产地陈皮药材中橙皮苷的含量〔J〕.中国实验方剂学杂志,2009,15(11):1-3.
7胡亚楠,冯素香,王淑美,等.脑脉通有效部位中阿魏酸的含量测定〔J〕.河南中医学院学报,2008,23(137):34-5.
8李军,姜华,石仁兵.HPLC测定甜叶菊有效部位中4个酚类成分含量〔J〕.药物分析杂志,2009,29(4):536-539.
9韩凤梅,李紫,蔡敏,等.山麦冬的HPLC-ESI-MS特征指纹图谱研究〔J〕.中草药,2005,36(9):1395.
〔收稿日期:2010-04-17〕