【摘 要】
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目的 构建携带p53基因新型增殖性腺病毒CNHK600-p53,研究其对肝癌细胞株抑制效应是否优于Ad-p53.方法 PCR扩增p53基因,利用酶切连接方法 将其插入CNHK600载体,PCR鉴定.经293细胞包装成病毒,抽提病毒DNA,PCR鉴定.氯化铯密度梯度离心法纯化病毒,TCID50 方法 测病毒滴度.病毒增殖实验检测病毒在不同细胞增殖能力.四甲基偶氮唑盐(methyl-thiazolyl
【机 构】
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200438,上海,第二军医大学东方肝胆外科医院综合治疗三科,长征医院消化内科,200438,上海,第二军医大学东方肝胆外科医院综合治疗三科,200438,上海,第二军医大学东方肝胆外科医院综合治疗三
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目的 构建携带p53基因新型增殖性腺病毒CNHK600-p53,研究其对肝癌细胞株抑制效应是否优于Ad-p53.方法 PCR扩增p53基因,利用酶切连接方法 将其插入CNHK600载体,PCR鉴定.经293细胞包装成病毒,抽提病毒DNA,PCR鉴定.氯化铯密度梯度离心法纯化病毒,TCID50 方法 测病毒滴度.病毒增殖实验检测病毒在不同细胞增殖能力.四甲基偶氮唑盐(methyl-thiazolyl tetrazolium assay,MTT)法观察CNHK600-p53、Ad-p53两种病毒分别对肝癌细胞株的抑制率.结果 成功构建新型增殖性腺病毒载体CNHK600-p53;293细胞包装成病毒,PCR方法 鉴定无野生型病毒存在;病毒滴度为1.99×10~（10）pfu/ml;CNHK600-p53在肝癌细胞HepG2、SMMC-7721内复制能力明显高于正常肝细胞HEL-1和L02.对6种肝癌细胞(PLC/PRF5、SMMC7721、HepaG2、BEL-7402、BEL-7404、QGY-7703)而言,随着MOI值的不断增高.其对肝癌细胞的抑制作用也不断增强;在相同MOI情况下,CNHK600-p53组较Ad-p53组的细胞抑制率高(P＜0.05).当细胞抑制率达到80%以上时.两组之间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 利用新型增殖性腺病毒CNHK600一p53较 Ad-p53能更有效的抑制肝癌细胞,可能成为肝癌的基因治疗更有效的一种基因治疗手段。
其他文献
目的 探讨改进的门静脉套管置入技术“门脉分支悬吊法”在大鼠肝移植门静脉重建中的应用效果。方法“双袖套法”建立大鼠肝移植模型，分别应用改进的“门脉分支悬吊法”和传统方法行受体门静脉重建，比较门静脉重建所需时间和成功率、无肝期时间以及移植手术成功率。结果应用改进的“门脉分支悬吊法”行大鼠肝移植（n=35），受体门静脉重建成功率94．3％，门静脉吻合所需时间仅为（1．9±0．7）min，无肝期为（21．
目的 观察慢性胰腺炎大鼠胰腺K_(ATP)通道的Kir6.2和SUR1亚基表达变化,以及那格列奈对其干预作用.方法 Wistar大鼠建立慢性胰腺炎模型后,随机分模型组、给药组和对照组,进行葡萄糖糖耐量实验,RT-PCR法检测各组Kir6.2和SUR1的mRNA水平,Western印迹法检测二者的蛋白表达.结果 模型组大鼠的糖耐量异常,胰腺K_(ATP)通道Kir6.2和SUR1亚基的mRNA水平和
腹腔镜手术用于肝外科,目前还处于探索阶段.我院腹腔镜外科近年采用完全腹腔镜下肝切除(total laparoscopic liver resection,TLLR)治疗肝脏肿瘤13例,效果较好. 临床资料 1.一般情况:2005年6月至2010年5月我科共采用完全腹腔镜肝切除治疗肝肿瘤13例.其中男8例,女5例;年龄29～77岁,平均52岁.术后病理证实肝海绵状血管瘤6例,原发性肝癌4例,肝转
医源性胆道损伤(iatrogenic bile duct injury)是每一位胆道外科医生职业生涯中难以回避的困扰,发生率约0.5%.究其原因与肝外胆道的解剖变异较为复杂密切相关,胆囊和肝外胆道的解剖变异发生率可高达50%.本文就肝外胆道变异与胆管损伤的关系加以探讨。
1.病例介绍:天津大港医院外二科2006年收治一例严重多发伤病人,该病人胃及十二指肠多处断裂,胰腺断裂,因合并严重头胸四肢外伤,故为其腹部行胃大部切除,十二指肠修补,胃空肠吻合,胰腺一期缝合,胰腺上下引流,空肠距离吻合口30 cm置窄肠营养管治疗。
目的 观察脾动脉缩窄对肝硬化门静脉高压大鼠脾脏iNOS、Th1/Th2型细胞因子表达的影响,并探讨机制.方法 肝硬化门静脉高压大鼠随机分3组(n=10):假手术组(SOG)、脾动脉缩窄术组(SAC)和脾动脉结扎术组(SAL);正常大鼠10只行假手术作为对照组(NCG).免疫组化法测脾脏iNOS表达,RT-PCR法测脾脏IFN-γ、IL-4mRNA表达,对iNOS与IFN-γ、IL-4表达量作相关分
高尔基体蛋白73(GP73)是细胞高尔基体上的一种Ⅱ型跨膜蛋白.近期越来越多的研究证明,GP73表达与原发性肝癌(PHC)关系密切,其敏感性和特异性均超过了甲胎蛋白(AFP),有可能成为诊断PHC,尤其是早期PHC新的血清标志物.文章对GP73与肝癌的关系做一综述。
胆道探查术已在各基层医院广泛开展,但对于器械致胆胰肠结合部损伤(IBCS)并未得到足够重视,此种损伤术中易漏诊,处置不当可产生腹膜后严重感染,病死率高达50%～100%[1],现就其成因及诊治进行探讨分析。
自从1991年Reich等[1]首次进行腹腔镜肝脏浅表良性肿瘤局部切除术以来,由于肝脏解剖的复杂性、断肝器械及经验不足等因素的限制,腹腔镜肝切除(laparoscopic hepatectomy,LH)尤其是完全腹腔镜下的肝段(叶)切除目前仍被认为是一项难度高、风险大的复杂手术.相对于其他的部位,左肝在解剖学上具有容易控制入肝血流与出肝血流的特点,具有易行腹腔镜下肝切除的优势.我们于2005年5月
原发性肝癌(primary liver cancer,PLC)是最常见的恶性肿瘤之一,手术仍然是治疗肝癌的有效手段,但转移和复发是影响肝癌治愈率的最主要障碍。