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目的
探讨D-半乳糖(D-Gal)致衰老细胞的线粒体能量代谢功能。
方法用含55 mmol/L D-Gal培养基培养人胚肺成纤维细胞(MRC-5)细胞72 h后，进行CCK8法细胞增殖能力分析、β-半乳糖苷酶染色、p21蛋白表达水平检测以鉴定细胞衰老，并通过分析细胞活性氧(ROS)水平、超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛含量及线粒体DNA(mtDNA)氧化损伤水平评价细胞氧化应激状态。通过电镜观察细胞的线粒体形态、流式细胞术分析线粒体数量、JC-1法检测线粒体膜电位、高效液相色谱(HPLC)法检测ATP含量、Seahorse细胞能量代谢检测系统分析线粒体氧耗率，评价线粒体结构和能量代谢功能。
结果D-Gal致MRC-5细胞增殖减缓，β-半乳糖苷酶染色显示蓝染细胞数增加，p21蛋白表达增高；D-Gal处理后细胞ROS和丙二醛水平升高，SOD活性下降，mtDNA氧化损伤水平增加。D-Gal处理组细胞线粒体嵴和双层膜结构变模糊，线粒体数量减少，线粒体膜电位下降，且ATP合成减少，线粒体氧化呼吸功能下降。
结论55 mmol/L D-Gal引起线粒体结构损伤和能量代谢功能下降，与细胞衰老相关。