【摘 要】
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目的 选取致病性钩端螺旋体(简称钩体)中高度保守,同时是钩体外膜蛋白中含量最多的两个脂蛋白LipL32和LipL21构建成融合基因DNA疫苗pVAX1/LipL21-LipL32,观察在BALB/c小鼠中
【机 构】
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上海交通大学医学院病原生物学教研室
【基金项目】
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上海市重点学科建设项目;国家高技术研究发展计划(863计划);国家自然科学基金
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目的 选取致病性钩端螺旋体(简称钩体)中高度保守,同时是钩体外膜蛋白中含量最多的两个脂蛋白LipL32和LipL21构建成融合基因DNA疫苗pVAX1/LipL21-LipL32,观察在BALB/c小鼠中重组DNA疫苗诱导免疫应答反应的能力.方法采用连接引物PCR构建融合基因LipL21-LipL32,并将其插入真核表达载体构成重组DNA疫苗pVAX1/LipL21-LipL32,脂质体转染人胚肾细胞(HEK293细胞)后Western Blot验证重组DNA疫苗在真核细胞中的表达,并将其肌注BALB/c小鼠,用显微凝集试验(MAT)检测所产生的特异性抗体与问号钩体的凝集效价,用IL-10和TNF-β细胞因子试剂盒检测体液免疫和细胞免疫应答水平.结果 Western Blot分析显示重组DNA疫苗pVAX1/LipL21-LipL32在HEK293细胞中得到表达,小鼠动物实验结果显示重组DNA疫苗能有效地诱导机体的体液免疫和细胞免疫应答.结论成功构建钩体融合基因LipL21-LipL32重组DNA疫苗,所表达的融合蛋白能诱导特异的免疫应答反应,为进一步研究和发展新型的钩体病疫苗提供了实验基础.
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