【摘 要】
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目的制备烟曲霉果胶裂解酶A(pectate lyase A,Ply A)重组蛋白质并鉴定其抗原性。方法对编码烟曲霉ply A基因的DNA序列进行优化和人工合成,序列分析验证,然后连接至表达载体p
【机 构】
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南京师范大学生命科学学院,南京军区南京总医院临床中心实验科
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目的制备烟曲霉果胶裂解酶A(pectate lyase A,Ply A)重组蛋白质并鉴定其抗原性。方法对编码烟曲霉ply A基因的DNA序列进行优化和人工合成,序列分析验证,然后连接至表达载体p ET-28a(+),并转化大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3)。用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白质表达,SDS-PAGE电泳分析重组蛋白质,并用Talon亲和层析柱纯化,western blot分析重组蛋白质与抗组氨酸标签蛋白(His-tag)单克隆抗体和侵袭性曲霉病患者血清中相应抗体的反应性。结果克隆出经过修饰改良的、适用于原核细胞表达的烟曲霉ply A基因的DNA序列;获得相对分子量约35 300的Ply A重组蛋白质;western blot结果显示该蛋白质可被抗His-tag抗体识别,并与曲霉病患者血清中抗体发生特异性免疫反应。结论成功表达烟曲霉Ply A重组蛋白质,初步证明该蛋白质的抗原性良好。
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