STAT1在结缔组织生长因子刺激人增生性瘢痕成纤维细胞增殖分化中的作用

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目的 基于既往研究,验证信号转导和转录活化因子1(STAT1)是否参与结缔组织生长因子(CTGF)刺激人增生性瘢痕成纤维细胞增殖分化过程.方法 取6例增生性瘢痕患者的手术切除组织,培养成纤维细胞.应用凝胶阻滞电泳(EMSA)方法 测定不同浓度(0、5、7.5、10、15ng/ml)CTGF刺激45 min和10 ng/ml CTGF刺激不同时间(0、10、20、30、45、60、90、120 min)对瘢痕成纤维细胞STAT1与DNA结合能力的影响.将瘢痕成纤维细胞分为CTGF刺激组、STAT1反义寡脱氧核苷酸(ASODN)转染组、STAT1 ASODN+CTGF组和空白对照组,用噻唑盐(MTT)法测定各组细胞培养1、2、3 d的增殖活性,RT-PCR测定α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA表达以反映瘢痕成纤维细胞向肌成纤维细胞分化活性.结果 瘢痕成纤维细胞中STAT1与DNA的结合活性随CTGF浓度而增强,当CTGF浓度为10 ng/ml时达峰值;10 ng/ml的CTGF刺激45-60 min达峰值.MTT法检测显示CTGF刺激组培养1~3 d增殖活性明显均高于空白对照组(均P<0.05),而STAT1 ASODN转染组和STATI ASODN+CTGF组均明显低于空白对照组和CTGF刺激组(均P<0.05).RT-PCR检测结果 显示,CTGF刺激组、STAT1 ASODN转染组、STAT1 ASODN+CTGF组和空白对照组瘢痕成纤维细胞向肌成纤维细胞分化活性分别为0.78±0.08、0.38±0.09、0.76±0.10和0.40±0.12,STAT1 ASODN转染组和空白组均明显低于CTGF刺激组和STAT1 ASODN+CTGF组(均P<0.05).结论 STAT1ASODN可明显抑制瘢痕成纤维细胞的增殖活性,并阻断CTGF对细胞增殖的刺激作用,提示STAT1参与CTGF调控人增生性瘢痕成纤维细胞增殖过程。

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