【摘 要】
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目的进行大鼠肾小球内皮细胞体外培养和鉴定,并观察高糖对其分泌一氧化氮(nitricoxide,NO)的影响。方法利用不同目数的筛网从大鼠肾皮质分离肾小球,Ⅳ型胶原酶消化后用内皮细
【机 构】
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第三军医大学附属新桥医院全军心血管内科研究所,第三军医大学军事预防医学院全军复合伤研究所
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目的进行大鼠肾小球内皮细胞体外培养和鉴定,并观察高糖对其分泌一氧化氮(nitricoxide,NO)的影响。方法利用不同目数的筛网从大鼠肾皮质分离肾小球,Ⅳ型胶原酶消化后用内皮细胞培养液培养。待细胞自肾小球内长出,以套环或挑克隆的方法纯化,在倒置显微镜下观察细胞形态,分别用Ⅷ因子相关抗原抗体和CD31荧光抗体对纯化后的细胞进行鉴定。不同浓度的高糖作用于培养的肾小球内皮细胞,Griess法检测各时相点培养液中NO的含量。结果倒置显微镜下观察纯化后的细胞为单层排列,似鹅卵石状,Ⅷ因子相关抗原抗体免疫组化染色和CD31荧光抗体染色阳性。高糖可以引起肾小球内皮细胞NO分泌减少,并呈浓度和时间依赖性。结论利用过筛法分离肾小球并在特定条件下进行培养、纯化,成功培养大鼠肾小球内皮细胞。高糖可以导致肾小球内皮细胞NO释放减少,这可能与糖尿病肾病的发生有关。
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