【摘 要】
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目的 探讨一种改良的简易灌注分离小鼠肝细胞的方法。方法 采用改良的简易两步灌注法分离小鼠肝细胞,即使用连有头皮针的注射器进行肝门静脉插管并灌流冲洗,再用Ⅳ型胶原酶灌
【基金项目】
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国家卫生计生委药政司委托研究课题(药政[2016]41号).
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目的 探讨一种改良的简易灌注分离小鼠肝细胞的方法。方法 采用改良的简易两步灌注法分离小鼠肝细胞,即使用连有头皮针的注射器进行肝门静脉插管并灌流冲洗,再用Ⅳ型胶原酶灌流消化;分离肝细胞后采用室温静止法进行纯化;利用锥虫蓝染色法鉴定细胞存活率;培养板预先用鼠尾胶原铺备,利用倒置显微镜观察细胞形态;细胞贴壁后1~10d检测培养液上清液中的白蛋白的分泌情况,判断肝细胞的生物学活性和功能。结果成功建立了一种简单易行的分离与培养小鼠原代肝细胞的方法。培养的小鼠肝细胞在接种后4h基本完成贴壁,细胞可稳定贴壁至少1周,成
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