己烯雌酚残留检测ELISA试剂盒的研制及应用

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在实验室前期制备的己烯雌酚多克隆抗体基础上建立间接竞争ELISA检测方法,研制出己烯雌酚残留ELISA快速检测试剂盒,并对其性能参数进行测定。结果表明,所选用的抗体对己烯雌酚亲和力高,除了与双烯雌酚、己烷雌酚的交叉反应率分别为6.83%和2.56%外,与其他结构类似物或功能类似物交叉反应率均小于0.01%;己烯雌酚残留检测的标准曲线为y=-28.71x+59.37,R2为0.9895,线性范围为0.08~8.17ng/mL,检测限IC10为0.05ng/mL,灵敏度IC50为1.09ng/mL,样品的加标回收率为80.04%~107.91%,平均批内和批间变异系数分别为6.41%和8.83%;与HPLC测定方法比对具有较高的相符性,相关系数R2为0.9882;该试剂盒在4℃下至少可保存6个月,可用于批量猪肉、鸡肉、鱼肉、饲料等样品中己烯雌酚残留的检测。“,”An indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay(ciELISA) test kit which was based on diethylstilbestrol(DES) polyclonal antibodies(PAbs) for the determination of DES residue in food of animal origin, and to evaluate its performance. The results showed that PAbs had high affinity and specificity to DES. The antibody had cross reactivity of 2.56% and 6.83% with other two synthetic anabolic HEX and DIEN, respectively, but had hardly cross reactivity with estrogen E2, E1, EST and P4. A standard curve was obtained and the regression equation was y=-28.71x+59.37, and R2 was 0. 9894. The linear range of the DES immunoassay was from 0.08 ng/mL to 8.17 ng/mL, with the detection limit(IC10) of 0.05 ng/mL, and sensitivity(IC50)1.09 ng/mL. The recoveries of DES were 80.04% to 107.91% with the coefficients of variation for intra-assay and inter-assay lots were 6.41% and 8.83%, respectively. Compared with HPLC, the correlation coefficient was 0.9808 and the preserving duration of the ELISA kit in 4 ℃ could be 6 months at least. The indirect competitive ELISA kit could be used for the screening analysis of residual DES in a large number of samples such as pork, chicken, fish and animal feeds, etc.
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