【摘 要】
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目的: 合成抗血管生成肽βpep-25片断, 构建并鉴定含βpep-25肽的重组原核表达质粒.方法: 人工设计合成βpep-25肽序列片断, 经测序正确后, 利用基因克隆技术将其克隆到pGEM-
【机 构】
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西安交通大学医学院第一附属医院肿瘤内科,西安华广生物工程有限公司
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目的: 合成抗血管生成肽βpep-25片断, 构建并鉴定含βpep-25肽的重组原核表达质粒.方法: 人工设计合成βpep-25肽序列片断, 经测序正确后, 利用基因克隆技术将其克隆到pGEM-T easy载体中, 构建重组质粒pGEM-T-βpep-25;用Nae I和BamH I双酶切pGEM-T-βpep-25后, 将T-βpep-25肽片断克隆到经Nae I和BamH I双酶切的重组载体pBV220-NT4中, 构建重组原核表达质粒pBV220-NT4-βpep-25, 并对其分别用BamH I酶切, EcoR I和BamH I双酶切分析.结果: 经酶切分析和DNA测序人工合成的肽βpep-25序列(113 bp)与文献报道结果一致;分别用BamH I酶切, EcoR I和BamH I双酶切重组原核表达质粒pBV220-NT4-βpep-25可以得到4 030 bp、 364 bp和3 666 bp的片段, 结果表明目的肽片段已经成功地克隆到了重组表达载体中, 说明重组原核表达质粒构建成功.结论: 抗血管生成肽βpep-25重组原核表达质粒的构建成功, 为进一步在细胞内外及动物模型研究其作用机制和抗肿瘤作用奠定了基础.
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