建立一种基于液相色谱法串联质谱检测血清糖化白蛋白的方法

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目的

建立同位素稀释液相色谱串联质谱(ID-LC/MS)测定血清糖化白蛋白的候选参考方法。

方法

方法学建立。以日本临床化学学会(JSCC)推荐的同位素稀释色谱质谱串联法为基础,采用SDS凝胶电泳法纯化血清白蛋白,加入13C及氘同位素标记的糖化赖氨酸及赖氨酸内标,同时将纯化的白蛋白分解为氨基酸片段,以赖氨酸及糖化赖氨酸纯品作标准品,选择和优化LC-MS分析条件,根据同位素峰面积比分别测定样本中赖氨酸和糖化赖氨酸含量。日本检查医学标准物质机构(ReCCS)糖化白蛋白标准物质JCCRM611-1验证参考方法的正确性;3个不同浓度的混合血清样本各测定3 d,评价该方法的精密度。分别用质谱法和常规酶法检测35份新鲜血清样本,比较两种方法的相关性。

结果

ReCCS糖化白蛋白标准物质JCCRM611-1M、H、HH的总CV分别为3.2%、2.3%和2.6%,结果与认定值的偏差分别为2.25%、2.38%和-1.21%。3个不同浓度的混合血清样本批内CV为0.33%~2.53%,批间CV为0.83%~1.32%,总CV为2.27%~3.2%。质谱法与常规酶法的相关系数R为0.993。

结论

同位素稀释色谱质谱串联法测定血清糖化白蛋白精密度高,正确性好,与常规酶法有较好的相关性,推荐其作为我国测定糖化白蛋白的候选参考方法。(中华检验医学杂志,2017, 40:793-798)

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