【摘 要】
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目的:为研究拮抗TNF-α的新型免疫抑制性ODN建立一种快速的筛选方法。方法:以CpGODN1826作为刺激剂,将其作用于小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞,6h后收集上清,作用于L929细胞,利用L
【机 构】
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吉林大学白求恩医学院免疫学教研室,吉林大学白求恩医学院分子生物学教研室,
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目的:为研究拮抗TNF-α的新型免疫抑制性ODN建立一种快速的筛选方法。方法:以CpGODN1826作为刺激剂,将其作用于小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞,6h后收集上清,作用于L929细胞,利用L929是TNF-α敏感细胞的原理,检测TNF-α活性。结果:筛选条件确定为CpGODN1826终浓度为20mg/L,RAW264.7上清液1/80倍稀释。放线菌素D浓度为1mg/L,L929细胞数在2×104个/孔,反应时间为18h。应用此条件成功筛选出自行设计的抑制性ODN-IMO03。结论:建立的实验体系,能很好的区分自行设计的ODN抑制CpGODN1826诱导的RAW264.7细胞的TNF-α的生物学活性。
OBJECTIVE: To establish a rapid screening method for studying novel immunosuppressive ODNs that antagonize TNF-α. Methods: CpG ODN1826 was used as stimulant in mouse macrophage RAW264.7 cells. After 6 hours, the supernatant was collected and treated with L929. The activity of TNF-α was detected by using L929 as a sensitive cell of TNF-α. Results: The screening conditions were determined to be a final concentration of 20 mg / L of CpG ODN1826 and a 1/80 dilution of RAW264.7 supernatant. Actinomycin D concentration of 1mg / L, L929 cells in 2 × 104 个 / hole, the reaction time was 18h. Using this condition, we successfully screened the self-designed inhibitory ODN-IMO03. CONCLUSION: The established experimental system can well distinguish the self-designed ODN from the biological activity of TNF-α induced by CpG ODN1826 in RAW264.7 cells.
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