Myostatin基因真核表达载体的构建及其在CHO细胞中的表达

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目的:构建人Myostatin基因的真核表达载体pVAC—Ms,并在真核细胞中进行表达,为后续研究Myostatin蛋白的检测方法、强力药物的筛选及废用性肌肉萎缩的治疗提供实验依据。方法:化学耦联方法合成Myostatin C-末端区(330bp)基因序列,利用PCR技术扩增5'端和3'端酶切位点为BamHI和EcoRI,然后克隆至真核表达载体pVAC1-cms,得到重组质粒pVAC—Ms。质粒纯化后采用脂质体介导转染CHO细胞,瞬时转染后收集CHO细胞,利用RT-PCR技术和细胞荧光免疫技术检测Myostatin在CHO细胞中的转录和蛋白表达。结果:酶切和测序结果表明,Myostatin真核表达载体pVAC—Ms构建成功,RT-PCR和细胞荧光免疫检测结果表明,瞬时转染的CHO细胞中Myostatin基因明显转录,蛋白明显表达。结论:实验成功构建了在真核细胞中能有效表达人Myostatin重组蛋白的真核表达载体,为运动员Myostatin蛋白表达的检测、强力药物筛选、训练监控及废用性肌肉萎缩治疗等方面的后续研究提供实验基础。
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