【摘 要】
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目的 克隆钝顶螺旋藻藻蓝蛋白(CPC)β、α亚基的基因序列,分别构建β和α亚基的原核表达载体,并在大肠杆菌内表达这2个亚基.方法 首先利用PCR技术扩增钝顶螺旋藻藻蓝蛋白基因
【机 构】
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河南大学第一附属医院,河南开封475000;鄂尔多斯市中心医院,内蒙古鄂尔多斯017000
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目的 克隆钝顶螺旋藻藻蓝蛋白(CPC)β、α亚基的基因序列,分别构建β和α亚基的原核表达载体,并在大肠杆菌内表达这2个亚基.方法 首先利用PCR技术扩增钝顶螺旋藻藻蓝蛋白基因序列,将扩增产物克隆入pGEM-Teasy载体内,测序分析插入片段的正确性.然后以克隆的cpc基因为模板分别扩增藻蓝蛋白的β和α亚基的编码基因cpcB和cpcA,经测序分析正确后将此二基因分别克隆入表达载体pGEX-4T-1,获得重组质粒pGEX-4T-cpcB和pGEX-4T-cpA.将所构建的重组质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3) pLysS内,用IPTG诱导重组蛋白表达.利用蛋白纯化树脂Glutathione SepharoseTM4 Fast Flow纯化目的蛋白,并测定其浓度.结果 在本次实验中成功克隆了钝顶螺旋藻的藻蓝蛋白β和α亚基的编码基因cpcB和cpcA,构建了它们的原核表达载体,并在大肠杆菌中分别表达了融合蛋白β-CPC-GST和α-CPC-GST,这2个重组蛋白的分子量分别为45 kDa和44 kDa,其中β-CPC-GST主要为包涵体,α-CPC-GST主要为分泌型表达.结论 克隆并在大肠杆菌内成功表达了钝顶螺旋藻藻蓝蛋白的β和α亚基.
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