链霉菌基因克隆载体及基因文库的构建

来源 :生物工程学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:qiujunzhang
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利用麦迪霉素产生菌中分离的质粒pSMY1(10.8kb),将pIJ30的硫链丝菌素抗性基因(tsr)克隆到pSMYJ上,获得了具有硫链丝菌素抗性选择标记质粒pSJ10。通过DNA体外缺失,片段播入、λ-COS片段的插入及与大肠杆菌质粒的重组等基因技术,获得了一系列pSMY1衍生质粒,包括双标记质粒pSM3,大肠杆菌/链霉菌穿梭质粒pBMJ2和穿梭粘粒pNMJ1。通过对这些质粒的分析,确定了质粒pSMY1的复制必需区为3.06kd的EcoRI-SphI片段。质粒pSJ10、pSM3、pNMJ1具有可选择标记
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