【摘 要】
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本研究旨在探讨脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对肝细胞脂质自噬的影响及其机制.体外培养人肝癌细胞株HepG2,用0.1 mmol/L软脂酸(palmitic acid,PA)负荷,分为对照(0 μg/mL LPS)组、LPS(10 μg/mL)组、LPS+DMSO组、LPS+雷帕霉素(rapamycin,RAPA,10 μmol/L)组.油红O染色观察HepG2细胞内脂质积聚情况;自噬双标腺病毒mRFP-GFP-LC3转染细胞后激光共聚焦显微镜观察细胞自噬流;通过氟硼二吡咯BODIP
【机 构】
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重庆医科大学脂质研究中心,脂糖代谢性疾病重庆市重点实验室,重庆400016
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本研究旨在探讨脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对肝细胞脂质自噬的影响及其机制.体外培养人肝癌细胞株HepG2,用0.1 mmol/L软脂酸(palmitic acid,PA)负荷,分为对照(0 μg/mL LPS)组、LPS(10 μg/mL)组、LPS+DMSO组、LPS+雷帕霉素(rapamycin,RAPA,10 μmol/L)组.油红O染色观察HepG2细胞内脂质积聚情况;自噬双标腺病毒mRFP-GFP-LC3转染细胞后激光共聚焦显微镜观察细胞自噬流;通过氟硼二吡咯BODIPY 493/503荧光染料和溶酶体标记物溶酶体关联膜蛋白1(lyso-somal associated membrane protein 1,LAMP1)进行脂滴和溶酶体的共定位,反映细胞内脂质自噬水平;Western blot检测哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)、p-mTOR、核糖体S6激酶 1(ribosome protein subunit 6 kinase 1,S6K1)、p-S6K1、LC3Ⅱ/Ⅰ、P62蛋白表达.结果显示,与对照组相比,LPS组细胞油红O染色红染脂滴增加,自噬体增加,自噬溶酶体明显降低,LAMP1/BODIPY共定位率降低(P＜0.05),p-mTOR/mTOR、p-S6Kl/S6K1和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高,P62蛋白表达增加(P＜0.05).加入RAPA干预后,与LPS+DMSO组相比,自噬体减少,自噬溶酶体明显增加,LAMP1/BODIPY共定位率升高(P＜0.05),肝细胞油红O染色红染脂滴减少(P＜0.001).综上,LPS通过激活mTOR通路抑制HepG2细胞脂质自噬,从而加重细胞内脂质积聚.
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