细菌人工染色体技术在人巨细胞病毒基因组小片段序列置换突变中的应用

来源 :中国医科大学学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hulala
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目的 评估细菌人工染色体技术在人巨细胞病毒(HCMV)基因组小片段序列突变中的作用。方法 选取HCMV LUNA基因位于UL80与UL82 2个基因之间的31 bp片段作为突变靶点,用含有同源臂的卡那霉素抗性序列对目的片段进行同源重组置换,电转化法对突变成功的病毒进行拯救,反转录PCR和cDNA克隆测序对LUNA,UL80及UL82 mRNA转录情况和转录本3'末端结构进行分析。结果 目的基因片段缺失成功,获得的单克隆中突变成功的比例〉3%,LUNA转录起始端序列突变的病毒拯救成功,UL80与UL82的m
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