【摘 要】
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[目的]针对银染PAGE实验中常出现的背景颜色深、条带弥散、凝胶变形及条带不整齐等问题进行归纳总结并提出优化方法.[方法]以甘蓝型油菜基因组DNA为研究对象,通过PAGE电泳后
【机 构】
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新疆大学生命科学与技术学院/新疆生物资源基因工程重点实验室,乌鲁木齐,830046新疆农业科学院经济作物研究所,乌鲁木齐,830091;
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[目的]针对银染PAGE实验中常出现的背景颜色深、条带弥散、凝胶变形及条带不整齐等问题进行归纳总结并提出优化方法.[方法]以甘蓝型油菜基因组DNA为研究对象,通过PAGE电泳后银染并调整试剂配方、实验条件,筛选出适合实验的技术体系.[结果]甲醇浓度、电压稳定性、电泳温度、气泡等显著影响实验结果.甲醛浓度过高(1.25％)时,虽所需染色时间短,但凝胶背景深;甲醛浓度过低(0.00125％)时,背景浅但条带淡,需要长时间染色;电压不稳定会造成条带弥散;电泳温度过高,导致凝胶变形,条带弯曲;凝胶中的气泡会扰乱DNA条带的形状;NaOH浓度在0.875％～1.375％,染色结果无明显差异.[结论]甲醛用量4 mL(1％)、保持稳定电压、在冰浴中电泳、制胶时及时赶走所有气泡,可得到凝胶背景浅、条带清晰且正常的结果.
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