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梅花鹿γ-干扰素在不同真核细胞系中稳定表达的研究

来源 :中国畜牧兽医 | 被引量 : 0次 | 上传用户：liusiyu111

【摘 要】

：

提取经植物血凝素诱导培养的梅花鹿外周血淋巴细胞总RNA,应用RT-PCR方法扩增出梅花鹿γ-干扰素成熟蛋白基因,经克隆测序表明与GenBank上发表的干扰素序列同源性为100%。将其

【作 者】

：

刘颖 王冰 于清龙 熊家军 杨利国 陈焕春 郭爱珍 

【机 构】

：

华中农业大学农业微生物学国家重点实验室,华中农业大学动物医学院预防兽医学省重点实验室,华中农业大学动物科技学院

【出 处】

：

中国畜牧兽医

【发表日期】

：

2010年5期

【关键词】

：

梅花鹿 Γ-干扰素 细胞系 真核表达 Cervus Nippon interferon-gamma cell lines eukaryotic expressi 

【基金项目】

：

国家973项目（2006CB504401）, 湖北省自然基金重大项目（2008CDA073）, 艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治科技重大专项（2009ZX10602-14 2008ZX10301）

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提取经植物血凝素诱导培养的梅花鹿外周血淋巴细胞总RNA,应用RT-PCR方法扩增出梅花鹿γ-干扰素成熟蛋白基因,经克隆测序表明与GenBank上发表的干扰素序列同源性为100%。将其重组到含有CMV增强子的真核表达载体质粒pCI-neo上。利用磷酸钙介导转染法将重组载体质粒pCI-neo-CerIFN-γ转染入中国仓鼠肾细胞（BHK-21）和牛肾细胞（MDBK）中,在G418抗性压力下进行筛选培养获得了稳定分泌表达的转染细胞系。通过Western blotting检测确定表达产物的相对分子质量分别为23、

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