研究冬凌草甲素(oridonin)对高糖高脂诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的保护作用机制。
方法体外培养HUVECs，噻唑蓝法(MTT)确定oridonin作用的最佳浓度；将细胞分为空白对照组、高糖高脂+oridonin预处理组(以下简称为oridonin预处理组，oridonin预处理细胞24 h)、高糖高脂组(高糖高脂的浓度为33.3 mmol/L葡萄糖+500 μmol/L棕榈酸，处理48 h)，利用流式细胞仪检测细胞凋亡率，观察各组细胞凋亡情况；酶联免疫吸附法(ELISA)检测上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素6(IL-6)的浓度，以观察细胞的炎症情况；实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)分析HUVECs内TAp63、沉默信息调节因子1(Sirt1)mRNA的表达水平；Western blotting分析TAp63、Sirt1及凋亡相关基因磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)、B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)的蛋白表达水平。两组间比较采用t检验，多组间采用单因素方差分析。
结果Oridonin作用于HUVECs细胞24 h的最佳浓度为5 μmol/L。高糖高脂组HUVECs细胞内TAp63(mRNA及蛋白)、Sirt1(mRNA及蛋白)、Bcl-2蛋白水平明显低于空白对照组(t=-22.50、-6.02、-16.22、-6.72、-7.71,均P<0.05)，HUVECs凋亡率、细胞内p-ERK蛋白表达及上清中炎症因子TNF-α、IL-6浓度明显高于空白对照组(t=14.34、12.59、17.37、17.90,均P<0.05)。与高糖高脂组相比，oridonin预处理组HUVECs内TAp63 mRNA和蛋白、Sirt1 mRNA和蛋白、Bcl-2蛋白表达明显升高(t=5.85、5.06、4.55、3.04、5.81，均P<0.05)，HUVECs凋亡率、细胞内p-ERK蛋白表达及上清中炎症因子TNF-α及IL-6的浓度明显下降(t= -7.11、-7.81、-10.51、-10.36，均P<0.05)。
结论冬凌草甲素能够抑制高糖高脂诱导的HUVECs的凋亡，可能与其抑制高糖高脂诱导的炎症反应和(或)增加TAp63、Sirt1、Bcl-2的表达，且降低p-ERK的表达有关。