论文部分内容阅读
目的探讨内质网应激(ERS)肿瘤微环境对胰腺癌中核转录因子(NF)-κB信号通路的激活效应,以及NF-κB对ERS分子伴侣葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的调控作用。方法采用Western印迹法检测经ERS诱导剂毒胡萝卜素(Tg)处理后人胰腺癌细胞系PANC-1细胞中ERS分子伴侣GRP78和NF-κB信号通路相关分子的表达情况,以及RNA干扰NF-κB/P65表达后GRP78的表达情况。通过反复Tg处理PANC-1细胞,建立ERS诱导细胞系PANC-ERS,采用细胞计数试剂盒(CCK)-8比色法检测其增殖能力,应用Transwell迁移试验检测其迁移能力。同时,采用Western印迹法检测PANC-ERS细胞中GRP78和NF-κB信号通路相关分子的表达情况。结果 Tg 2.5、5.0μg/mL处理组GRP78条带的光密度值分别为555 855.3±28 310.3、945 831.0±20 643.2,均显著高于未处理组的352 606.7±15 843.8(P值均<0.05),较未处理组分别上调了(1.57±0.05)和(2.64±0.13)倍。Tg 2.5、5.0μg/mL处理组NF-κB/P65条带的光密度值分别为1 470 315.0±18 036.6、2 231 275.3±218 250.8,均显著高于未处理组的1 061 648.3±61 723.7(P值均<0.05),较未处理组分别上调了(1.38±0.05)和(2.07±0.16)倍。Tg 2.5、5.0μg/mL处理组的IKBα条带的光密度值分别为228 153.3±325 929.1、106 070.0±6 550.5,均显著低于未处理组的318 308.3±20 897.7(P值均<0.05),较未处理组分别下调了(72.2±13.9)%和(32.9±2.1)%。shNF-κB/P65干扰后NF-κB/P65和GRP78的光密度值分别为714 109.7±12 774.6和467 384.3±10 745.5,均显著低于shSCR干扰后的1 448 839.3±15 362.5和894 971.3±6 772.0(P值均<0.05),下调幅度分别为(47.6±0.5)%和(50.4±2.3)%。培养2、3、4d的PANC-ERS细胞的光密度值分别为0.557±0.066、0.883±0.082、1.375±0.125,分别显著高于PANC-1细胞的0.445±0.059、0.686±0.069、0.948±0.114(P值均<0.05)。Transwell迁移实验显示,光学显微镜下见穿过小室的PANC-ERS细胞数为171.2±9.4,显著多于PANC-1细胞的127.7±8.9(P<0.05)。正常培养基培养3代后的PANC-ERS细胞中GRP78和NF-κB/P65条带的光密度值分别为1 147 799.3±47 206.4和1 387 829.0±34 749.2,均显著高于PANC-1细胞中的656 958.0±12 639.2和903 576.0±7 672.9(P值均<0.05),较PANC-1细胞分别上调(1.76±0.06)和(1.55±0.02)倍;PANC-ERS细胞与PANC-1细胞中NF-κB的抑制蛋白IKBα的光密度值分别为345 592.3±13 767.2和319 723.3±1 035.6,差异无统计学意义(P>0.05)。结论体外模拟胰腺癌ERS微环境,NF-κB信号通路可被激活,GRP78表达上调。ERS微环境下GRP78表达上调可能与NF-κB信号通路激活有关。慢性的ERS刺激可增高胰腺癌细胞表型的恶性程度,胰腺癌的高度恶性可能与其ERS微环境相关。