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目的：研究冻存的精原干细胞体外分离培养的生物学特性，为今后冻存精原干细胞的批量培养和长期利用提供依据。方法：取7～8d的sD雄性大鼠，分离睾丸组织，用两步酶消化法和差速时间贴壁法，分离精原干细胞和支持细胞。以二甲基亚砜（DMSO）作冷冻保护液，将分离到的精原干细胞放置于液氮中冻存；利用体外培养体系，进行支持细胞的培养和饲养层的制备；然后将复苏的精原干细胞接种到支持细胞饲养层上培养，并利用碱性磷酸酶鉴定精原干细胞。结果：用两步酶消化法和差速贴壁法能分离到纯度较高的精原干细胞和支持细胞，冻存的SSCs解冻后能