【摘 要】
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本研究以棕色棉品种'棕1-61'为受体材料,以β-葡萄糖苷酸酶基因(GUS)为报告基因,探索农杆菌介导离体培养胚珠的遗传转化条件.结果表明最适合的遗传转化条件是:1 DPA胚珠预培
【机 构】
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河北农业大学农学院,保定,071000;中国农业科学院棉花研究所,棉花生物学国家重点实验室,安阳,455000
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本研究以棕色棉品种'棕1-61'为受体材料,以β-葡萄糖苷酸酶基因(GUS)为报告基因,探索农杆菌介导离体培养胚珠的遗传转化条件.结果表明最适合的遗传转化条件是:1 DPA胚珠预培养4d后,用针头进行扎孔处理形成伤口,在OD600为0.6～0.8的农杆菌菌液中侵染3 min,22 ℃黑暗条件下共培养20h后转移至含500 mg/L卡那霉素的BT培养基上进行暗培养.GUS染色结果发现,暗培养20 d的胚珠和30 d的纤维上均有染色,证明GUS报告基因转化成功.进一步将目的基因GhUFGT构建RNAi载体并进行转基因,荧光定量PCR检测发现转基因阳性胚珠中GhUFGT基因的表达量与对照相比显著下降.该实验为研究纤维发育和色泽相关基因的功能提供了一种快速高效的遗传转化方法.
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