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内参基因表达稳定性的高低将决定着实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)分析结果的可靠程度。本实验旨在筛选不同浓度氨基葡萄糖(glucosamine,GluN)处理下产蛋后期笼养蛋鸡(Gallus gallus domesticus)中稳定可靠的内参基因,以确保产蛋后期蛋鸡基因表达分析结果的可靠性。实验选用500日龄产蛋后期海兰灰蛋鸡作为研究对象,对照组饲喂玉米-豆粕型基础饲粮,实验组分别在基础饲粮中添加0.4%、0.6%和0.8%GluN,运用q RT-PCR技术对核糖体蛋白S2(ribosomal protein S2,RPS2)、肌动蛋白(β-Actin)、3-磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)、羟甲基胆色烷合成酶(hydroxymethyl biliary synthetase,HMBS)、端粒结合蛋白(TATA-box binding protein,TBP)、次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶1(hypoxanthine phosphoribosyltransferase 1,HPRT1)、微管蛋白(tubulin beta class,TUBB)、琥珀酸脱氢酶复合物亚单位A(succinate dehydrogenase complex flavoprotein subunit A,SDHA)、核糖体蛋白L4(ribosomal protein L4,RPL4)和微球蛋白(beta-2 microglobulin,B2M)等10个内参基因在不同组织中(心、肝、肺、肾、十二指肠、胫骨、胰和子宫)的表达情况进行分析,同时借助循环阈值法(cycle threshold,Cq)、Delta循环阈值法(Delta cycle threshold,Delta CT)和ge Norm、Norm Finder、Ref Finder软件对每个内参基因的表达稳定性进行评估。结果显示,在利用原始Cq平均值分析时发现,同一内参基因在不同处理和不同组织中的表达量不同,说明所选择的10个候选内参基因在组织间存在一定的表达差异性;Cq值法分析显示,RPS2基因的表达稳定性最好;Delta CT法分析发现,不同的GluN水平处理条件下,内参基因的表达稳定性并不相同,综合来看TUBB、β-Actin和RPS2基因的稳定性相对较好;ge Norm程序在不同的GluN水平下,依次给出了TBP/RPS2(1.08)、RPS2/β-Actin(0.88)、TBP/TUBB(1.16)和RPS2/HMBS(0.77)表达稳定性内参基因组合,由此说明TBP、β-Actin和RPS2基因的稳定性较好;Norm Finder程序分析显示RPS2和HMBS基因表达稳定性较好;Ref Finder在线分析软件显示,0.0%GluN和0.8%GluN条件下RPS2基因稳定性最高。综合本研究的分析结果,RPS2和TBP这样的内参基因适合用于产蛋后期笼养蛋鸡基因定量表达分析,而内参基因RPL4的表达稳定性最差,最不适合用于蛋鸡的定量分析内参,本实验结果对GluN处理下矫正目的基因的表达提供了理论依据。