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探讨用低变性温度共扩增PCR（COLD-PCR）方法提高BCR-ABL1融合基因激酶区耐药突变检测灵敏度的可行性。
方法本研究为实验诊断研究。设计常规巢式PCR（CN-PCR）和COLD-PCR方案扩增BCR-ABL1激酶区全长，扩增产物纯化后用Sanger测序法检测激酶区突变（KDM）。采集32例经伊马替尼（IM）治疗并出现耐药的慢性粒细胞性白血病（CML）患者和20例初诊CML患者外周血或骨髓标本，用上述2种方案检测标本中的KDM。用PCR扩增和基因克隆方法鉴定患者标本中KDM所占比例。制备含不同KDM比例的标准品，对比分析2种方法的检测灵敏度。
结果32例IM耐药患者中，共检出15种KDM。其中用CN-PCR方法检出23例（71.9%）KDM阳性，用COLD-PCR检出28例（87.5%）KDM阳性。在20例初诊CML患者中，用CN-PCR未检出KDM，用COLD-PCR方法检出1例有p.E459K突变，突变型基因比例为3.5%。对于16种不同类型的KDM，COLD-PCR方法可提高检测灵敏度4~12倍。
结论用COLD-PCR方法可有效提高BCRABL1激酶区耐药突变的检测灵敏度，有助于早期发现耐药突变。（中华检验医学杂志,2013,36:246-251）