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【摘 要】应用Identifiler荧光标记复合扩增系统对175例新疆克拉玛依地区维吾尔族无关个体血样DNA进行15个STR基因座的复合扩增,用ABI3130遗传分析对扩增产物进行检测,用GeneMapper软件进行基因分型,并进行统计分析,获得了群体遗传学调查数据,为新疆克拉玛依地区法医学实践中的个人识别、亲权鉴定和DNA数据库技术提供基础数据和参数。
【关键字】人群;STR基因座;遗传;多态性;研究
1、材料和方法
1.1材料
来自本实验室日常检案积累175份健康无关个体血样。
1.2方法
1.2.1DNA提取
使用Chelex-100法提取样板DNA[1]。
1.2.2PCR反应
采用美国ABI公司生产的5色荧光系统:Identifiler Kit进行扩增。一次扩增15个STR基因座及Amelogenin基因,包括CODIS系统13个核心基因座(D8S1179,D2S11,D7S820,CSF1PO,D3S1358,TH01,D13S317,D16S539,VWA,TPOX,D18S51,FGA,D5S818)和欧洲SGM系统中的D2S1338和D19S433两个STR位点。PCR反应总体系10μl,其中4.2μl,primer2.2μl,Taq Gold酶0.2μl,DNA模板适量,加灭菌超纯水补足至10μl,PCR反应在9700型扩增仪上进行,循环条件参照操作手册。
1.2.3扩增产物的检测
用ABI3130遗传分析仪进行毛细管电泳分离,用DNA Collection软件收集电泳信息,GeneMapper软件对其进行分型,得到STR分型结果。
1.2.4统计学分析
通过PowerStarts软件分析原始数据,计算出各基因型、基因频率(F),对基因频率分布进行χ2检验,统计分析个基因座的实际杂合度(H)、期望杂合度(He)、无关个体偶合概率(PM)、个人识别能力(DP)、非父排除率(PE)、多态信息含量(PIC),并计算累计非父排除率[2](TPE)和累计个体识别率(TDP)等群体遗传学及法医学参数。
2、结果
新疆克拉玛依地区维吾尔族人群无关个体15个STR基因座等位基因频率分布参数见表1。
基因频率分布按低频率等位基因并组法,将基因频率等于和小于0.058的等位基因并组[3],经χ2检验,P>0.05,符合Hardy-Weinberg平衡。在新疆克拉玛依维吾尔族群体中,15个STR基因座共检出147个等位基因,其基因频率分布在0.0028~0.4029之间,观察杂合度在65.7%~85.7%之间,偶合概率在0.034~0.121之间,个体识别率在0.840~0.966之间,非父排除率在0.365~0.709之间,多态信息量在0.613~0.863之间,15个STR基因座的累计非父排除率(TPE)达0.99984,累计个体识别率(TDP)值大于0.9999999999。
3、讨论
Identifiler荧光标记复合扩增系统同时扩增的15个STR基因座及Amelogenin基因的片段长度绝大多数均控制在100~340bp之间,非常适合法医物证检材的分析需要。从本次得到的结果来看,该系统中的TPOX基因座的观察杂合度只有0.658,个体识别率只有0.840,根据H=0.7,DP=0.9的基因座是具有高度鉴别能力基因座的标准,这个基因座不适合用于针对克拉玛依地区维吾尔族人群的法医学实践。因此需要进一步寻找适合维吾尔族的新STR基因座,并开发出更适合维吾尔人群的荧光标记复合扩增试剂盒,以应用于法医学实践。
【关键字】人群;STR基因座;遗传;多态性;研究
1、材料和方法
1.1材料
来自本实验室日常检案积累175份健康无关个体血样。
1.2方法
1.2.1DNA提取
使用Chelex-100法提取样板DNA[1]。
1.2.2PCR反应
采用美国ABI公司生产的5色荧光系统:Identifiler Kit进行扩增。一次扩增15个STR基因座及Amelogenin基因,包括CODIS系统13个核心基因座(D8S1179,D2S11,D7S820,CSF1PO,D3S1358,TH01,D13S317,D16S539,VWA,TPOX,D18S51,FGA,D5S818)和欧洲SGM系统中的D2S1338和D19S433两个STR位点。PCR反应总体系10μl,其中4.2μl,primer2.2μl,Taq Gold酶0.2μl,DNA模板适量,加灭菌超纯水补足至10μl,PCR反应在9700型扩增仪上进行,循环条件参照操作手册。
1.2.3扩增产物的检测
用ABI3130遗传分析仪进行毛细管电泳分离,用DNA Collection软件收集电泳信息,GeneMapper软件对其进行分型,得到STR分型结果。
1.2.4统计学分析
通过PowerStarts软件分析原始数据,计算出各基因型、基因频率(F),对基因频率分布进行χ2检验,统计分析个基因座的实际杂合度(H)、期望杂合度(He)、无关个体偶合概率(PM)、个人识别能力(DP)、非父排除率(PE)、多态信息含量(PIC),并计算累计非父排除率[2](TPE)和累计个体识别率(TDP)等群体遗传学及法医学参数。
2、结果
新疆克拉玛依地区维吾尔族人群无关个体15个STR基因座等位基因频率分布参数见表1。
基因频率分布按低频率等位基因并组法,将基因频率等于和小于0.058的等位基因并组[3],经χ2检验,P>0.05,符合Hardy-Weinberg平衡。在新疆克拉玛依维吾尔族群体中,15个STR基因座共检出147个等位基因,其基因频率分布在0.0028~0.4029之间,观察杂合度在65.7%~85.7%之间,偶合概率在0.034~0.121之间,个体识别率在0.840~0.966之间,非父排除率在0.365~0.709之间,多态信息量在0.613~0.863之间,15个STR基因座的累计非父排除率(TPE)达0.99984,累计个体识别率(TDP)值大于0.9999999999。
3、讨论
Identifiler荧光标记复合扩增系统同时扩增的15个STR基因座及Amelogenin基因的片段长度绝大多数均控制在100~340bp之间,非常适合法医物证检材的分析需要。从本次得到的结果来看,该系统中的TPOX基因座的观察杂合度只有0.658,个体识别率只有0.840,根据H=0.7,DP=0.9的基因座是具有高度鉴别能力基因座的标准,这个基因座不适合用于针对克拉玛依地区维吾尔族人群的法医学实践。因此需要进一步寻找适合维吾尔族的新STR基因座,并开发出更适合维吾尔人群的荧光标记复合扩增试剂盒,以应用于法医学实践。