目的:对准确分离植物内生真菌的方法和适宜的培养条件进行研究。方法:采用75%乙醇、次氯酸钠溶液(活性氯含量1.3%～5.2%)浸泡和无菌水洗涤工艺对植物材料进行表面灭菌,以灭菌强度逐步递减的方式,确定最佳分离植物内生真菌的表面灭菌强度;设置超净工作台无菌状态检测对照、漂洗液无菌检测对照和组织印迹无菌检测对照3种对照处理,确保适度的表面灭菌强度;采用不同的培养基分离培养内生真菌。结果:高浓度杀菌剂短时间处理比低浓度杀菌剂长时间处理更适合植物内生真菌的分离;使用10%马铃薯葡萄糖双抗培养基、22℃低温培养,能抑制快生型菌株的疯长,从而使慢生型菌株拥有一定的生长空间,最大限度地分离所有植物内生真菌;同时设置3种对照处理可以确保植物内生真菌分离的准确性。结论:设计合适的表面灭菌方法、表面灭菌效果检测方法和分离培养方法对植物内生真菌的分离至关重要。