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目的 构建pRV-Display-NY-ESO-1真核表达质粒,建立并检测稳定表达纽约人食管鳞状细胞癌抗原(NY-ESO-1)的Myc-CaP细胞株.方法 从Genbank查找NY-ESO-1基因全长序列,聚合酶链反应(PCR)扩增目的片段,克隆至pDisplay载体,构建pDisplay-NY-ESO-1真核表达质粒,双酶切证实NY-ESO-1插入后,PCR扩增并定向连入pRV载体,构建pRV-Display-NY-ESO-1真核表达质粒,同时构建pDisplay-绿色荧光蛋白(GFP)作为阳性对照.经酶切、测序鉴定后,用Phoenix细胞产生逆转录病毒,脂质体转染法将重组质粒转入Myc-CaP细胞,并用Western blot和流式细胞术鉴定稳定转染的Myc-CaP细胞中NY-ESO-1的表达.结果 经PCR、测序鉴定成功构建pRV-Display-NY-ESO-1真核重组质粒.表达GFP的Phoenix细胞和Myc-CaP细胞在倒置荧光显微镜下均可见绿色荧光.Western blot检测Myc-CaP细胞中NY-ESO-1表达阳性,流式细胞术鉴定携带目的基因的Myc-CaP细胞纯度均大于80%.结论 pRV-Display-NY-ESO-1真核重组质粒稳定高表达于Myc-CaP细胞。