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目的:建立一种高效、简便的荧光实时定量PCR方法,用于重组杆状病毒鉴定及病毒滴度的检测。方法:利用Bac—to—Bac载体系统在昆虫细胞中构建含人IL—18基因的重组杆状病毒,收获的病毒母液以10倍梯度系列稀释后,提取病毒基因组DNA。以10倍梯度稀释的重组杆状病毒穿梭质粒(bacmid)作为标准模板,进行荧光定量PCR反应扩增IL—18基因片段并绘制标准曲线,然后以上述的重组杆状病毒基因组DNA作为模板,采用同样体系进行实时PCR反应检测,同时用琼脂糖空斑法测定病毒母液的滴度。结果:成功构建了重组杆状病