舍格伦综合征A抗原(SSA60)在巴斯德毕赤酵母中的高效分泌表达及胶体金快速检测方法的建立

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目的在巴斯德毕赤酵母中表达舍格伦综合征A抗原(SSA60)并建立胶体金快速检测方法。方法表达质粒pPIC9k—SSA60用电穿孔法转化酵母菌SMD1168,在MD平板上筛选重组克隆,用G418快速筛选高拷贝转化子,阳性克隆经甲醇诱导表达后,培养上清用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)和斑点免疫金渗滤法(DIGFA)鉴定。结果表达产物SSA60的分子量约60000,高拷贝巴斯德毕赤酵母转化菌的表达水平明显高于低拷贝的,表达量占分泌总蛋白60%以上,产物浓度为600~950mg/L。DIG
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