目的 探讨肝癌缺失基因-1(DLC-1)基因主要结构域在调控人结肠癌HT29细胞增殖中的作用.方法 分别构建DLC-1基因Rho蛋白GTP酶活化蛋白(RhoGAP)、SAM、START结构域敲除的亚克隆重组质粒,并转染至人结肠癌HT29细胞,另设野生型HT29细胞组(对照组)、pcDNA3.1-HT29细胞组(空载体组)和pcDNA3.1-HT29-DLC-1细胞组(全长转染组)作为对照.应用四甲基偶氮唑盐(MTT)实验、平板克隆实验检测细胞增殖的改变；流式细胞术检测细胞凋亡；pull-down方法分析RhoA蛋白活性.组间差异采用方差分析.结果 转染成功48 h后,与对照组及空载体组相比,全长转染组细胞增殖(F=146.36)及RhoA蛋白活性(F＝698.08)明显抑制(P均＜0.05),细胞早期凋亡增加(F=294.08,P＜0.05).敲除RhoGAP转染组细胞的增殖能力(F＝0.99)、细胞凋亡(F=0.049)及RhoA蛋白活性(F=5.769)与对照组及空载体组相比差异均无统计学意义(P均＞0.05)；敲除SAM转染组细胞比DLC-1基因全长转染组更显著地抑制了细胞增殖(F=31.00,P＜0.05),使RhoA蛋白活性下调(F=92.57,P＜0.05),凋亡增加(F=130.44,P＜0.05)；敲除START转染组相对于DLC-1基因全长转染组,细胞增殖能力增强(F＝15.47,P＜0.05),凋亡细胞减少(F=110.23,P＜0.05),RhoA蛋白活性上调(F＝199.39,P＜0.05).结论 DLC-1基因抑制HT29细胞增殖具有RhoGAP依赖性,SAM结构域可能是内源性RhoGAP活性的自身抑制区域,START结构域可能协助RhoGAP结构域而起作用。
肝癌缺失基因-1基因结构域调控人结肠癌HT29细胞增殖的实验研究
【摘 要】
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目的 探讨肝癌缺失基因-1(DLC-1)基因主要结构域在调控人结肠癌HT29细胞增殖中的作用.方法 分别构建DLC-1基因Rho蛋白GTP酶活化蛋白(RhoGAP)、SAM、START结构域敲除的亚克隆重组质粒,并转染至人结肠癌HT29细胞,另设野生型HT29细胞组(对照组)、pcDNA3.1-HT29细胞组(空载体组)和pcDNA3.1-HT29-DLC-1细胞组(全长转染组)作为对照.应用四甲
【机 构】
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210009南京,江苏省肿瘤医院内科,江苏建康职业学院医护系,东南大学医学院病理系,东南大学医学院病理系,东南大学医学院病理系,东南大学医学院病理系,东南大学医学院病理系
【出 处】
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中华消化杂志
【发表日期】
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2012年32期
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