【摘 要】
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目的 在毕赤酵母中表达重组人组织型纤溶酶原激活剂衍生物(rPAm),并检测rPAm的活性.方法 用PCR从质粒pLFrGGI上扩增出目的 蛋白(rPAm)基因,再亚克隆到酵母表达载体pMEX9K中,
【机 构】
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军事医学科学院微生物流行病研究所,北京,100071
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目的 在毕赤酵母中表达重组人组织型纤溶酶原激活剂衍生物(rPAm),并检测rPAm的活性.方法 用PCR从质粒pLFrGGI上扩增出目的 蛋白(rPAm)基因,再亚克隆到酵母表达载体pMEX9K中,转化到宿主菌GS115,菌落PCR鉴定转化子,重组酵母经甲醇诱导后,通过SDS-PAGE及Western-blot分析鉴定表达产物,再通过层析法纯化目的 蛋白,用溶圈法测定目的 蛋白的活性.结果 表达的重组蛋白分子量约为50 kD.纯化后的目的 蛋白的纯度可达到95%.Western-blot显示能与抗tPA抗体特异性结合,纯化后rPAm比活性为5.02×105 IU/mg,比活性与t-PA相当.结论 成功构建了rPAm酵母表达工程菌,建立了对目的 蛋白的纯化方法.
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