【摘 要】
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目的 构建信号传导与转录激活因子3 (signal transducer and activator of transcription factor 3,STAT3)二聚化抑制剂筛选模型,为STAT3抑制剂筛选提供实验方法.方法 分别构
【机 构】
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中国海洋大学海洋国家实验室海洋药物与生物制品功能实验室,医药学院,山东青岛266003
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目的 构建信号传导与转录激活因子3 (signal transducer and activator of transcription factor 3,STAT3)二聚化抑制剂筛选模型,为STAT3抑制剂筛选提供实验方法.方法 分别构建pECFP-N1-STAT3和pEYFP-N1-STAT3的荧光报告栽体,利用脂质体转染技术将二者共转入HEK-293T细胞,利用ECFP和EYFP2种荧光蛋白之间能量共振转移,检测磷酸化STAT3分子的二聚化水平,并检测Stattic对二聚化的影响.结果 成功构建了pECFP-N1-STAT3和pEYFP-N1-STAT3的荧光报告载体.将2种荧光报告载体共转染HEK-293T细胞后,Western Blot检测结果显示STAT3以及p-STAT3的表达水平明显增加.以458 nm波长激发ECFP,其发射波长可激发EYFP.加入STAT3二聚化抑制剂Stattic后,荧光强度降低,且呈现一定的剂量依赖性.结论 基于荧光共振能量转移技术的STAT3二聚化抑制剂筛选模型构建成功.
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