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目的
评价沉默调节蛋白1(SIRT1)介导糖尿病大鼠心肌线粒体自噬的机制与线粒体融合蛋白2(Mfn2)的关系。
方法SPF级健康成年雄性SD大鼠24只,体重210~220 g,采用随机数字表法分为3组(n=8):对照组(C组)、糖尿病组(DM组)、糖尿病+SIRT1激动剂SRT1720组(DM+SRT组)。采用腹腔注射1%链脲佐菌素60 mg/kg的方法建立大鼠糖尿病模型。DM+SRT组连续7 d尾静脉注射SIRT1激动剂SRT1720 1 mg/kg。随后采用超声法测定心功能指标:左室舒张末期容积(LVEDV)、左室收缩末期容积(LVESV)、左室射血分数(LVEF)、心率(HR)、舒张早期心室充盈速度最大值(E)、舒张晚期心室充盈速度最大值(A)和峰值流速比值(E/A比值);取心肌组织,采用免疫共沉淀法检测SIRT1与Mfn2的结合水平、Mfn2乙酰化水平;Western blot法检测SIRT1、Mfn2、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)、LC3Ⅰ、Beclin1和P62的表达,计算LC3Ⅱ与LC3Ⅰ的比值(LC3Ⅱ/Ⅰ)。
结果与C组比较,DM组LVEDV、LVEF、HR、E和E/A比值降低,A升高,LC3Ⅱ/Ⅰ比值降低,Beclin1、SIRT1和Mfn2表达下调,P62表达上调,Mfn2-SIRT1结合水平降低(P<0.05)。与DM组比较,DM+SRT组LVEDV、LVEF、E和E/A比值升高,A降低,LC3Ⅱ/Ⅰ比值升高,Beclin1和SIRT1表达上调,P62表达下调,Mfn2-SIRT1结合水平升高,Mfn2乙酰化水平降低(P<0.05)。
结论SIRT1介导糖尿病大鼠心肌线粒体自噬的机制与其对Mfn2的去乙酰化作用有关。