论文部分内容阅读
目的
探讨转录因子E2F1对脂肪间充质干细胞(ADSCs)增殖、分化的影响及其可能的作用机制。
方法选取6~8周龄野生型(WT)和E2F1基因敲除(E2F1-/-)小鼠,分离获取WT和E2F1-/-原代ADSCs,培养至第4代(P4),观察比较两组细胞形态及鉴定细胞表面标志物。细胞计数试剂盒(CCK-8)检测两组细胞的增殖能力,并经14 d成脂诱导分化后行油红O染色,观察脂滴的形态及数目。Western blot检测两组细胞中过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)蛋白水平的表达。
结果成功获得稳定传代的ADSCs,体外观察两组细胞形态比较差异无统计学意义,细胞表面标志物CD29、CD44、CD90为阳性,而CD31为阴性。细胞计数试剂盒(CCK-8)结果显示,WT ADSCs较E2F1-/-ADSCs增殖能力强(1.85±0.03比1.32±0.20,t=16.641,P<0.05)。成脂诱导结果表明,WT ADSCs组脂滴较大较圆,且脂滴数目多于E2F1-/-ADSCs组(1 890±128比1 109±116,t=18.505,P<0.05)。Western blot结果表明,WT ADSCs组PPAR-γ蛋白表达水平较E2F1-/-ADSCs组高(0.81±0.02比0.44±0.01,t=3.040,P<0.05)。
结论转录因子E2F1通过促进PPAR-γ的表达从而增强ADSCs的增殖及成脂分化作用。