【摘 要】
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目的探讨1a，25(OH)2D3对心肌细胞生物钟基因Bmal1 mRNA、Per2 mRNA和Rev-erba mRNA表达的影响。方法分离培养7日龄SD大鼠乳鼠心肌细胞，并用免疫荧光法鉴定。原代心肌细胞培养72 h后，设置1a，25(OH)2D3 5个终浓度梯度即0 nmol/L、1 nmol/L、10 nmol/L、50 nmol/L和100 nmol/L处理心肌细胞2 h，然后提取细胞RNA
【机 构】
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目的探讨1a，25(OH)2D3对心肌细胞生物钟基因Bmal1 mRNA、Per2 mRNA和Rev-erba mRNA表达的影响。
方法分离培养7日龄SD大鼠乳鼠心肌细胞，并用免疫荧光法鉴定。原代心肌细胞培养72 h后，设置1a，25(OH)2D3 5个终浓度梯度即0 nmol/L、1 nmol/L、10 nmol/L、50 nmol/L和100 nmol/L处理心肌细胞2 h，然后提取细胞RNA，实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测生物钟基因(Bmal1、Per2、Rev-erba)表达量变化，以确定1a，25(OH)2D3最佳处理浓度。再将培养72 h的原代心肌细胞分为3组，对照组：无血清培养基培养；血清休克组：含体积分数50%马血清的DMEM培养2 h；1a，25(OH)2D3处理组：最佳1a，25(OH)2D3浓度培养2 h。分别于7个时间点(0 h、4 h、8 h、12 h、16 h、20 h、24 h)收集细胞，提取细胞总RNA，再采用RT-PCR分析心肌细胞生物钟基因(Bmal1，Per2，Rev-erba)的转录水平。
结果1a，25(OH)2D3培养浓度为50 nmol/L时，Bmal1 mRNA表达水平最高，Per2和Rev-erba mRNA表达水平最低。与对照组相比，1a，25(OH)2D3处理组和血清休克组均引起心肌细胞Bmal1、Per2和Rev-erba基因呈日周期的节律振荡，且Bmal1和Per2的表达模式呈相反的时相表达，在12 h时Bmal1的表达量出现在波峰，而Per2的表达量出现在波谷。Rev-erba的表达变化趋势在8 h开始上升，在12～16 h出现最高表达量。
结论1a，25(OH)2D3可影响心肌细胞生物钟基因Bmal1、Per2和Rev-erba mRNA表达。
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