【摘 要】
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目的 通过RNA干扰技术沉默Rce1基因,探讨Rce1对舌癌细胞侵袭和迁移能力的影响.方法 体外培养舌鳞状细胞癌Cal-27和SCC-4细胞,设计合成Rce1基因的小干扰RNA(siRNA),采用脂质体
【机 构】
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青岛市城阳区人民医院口腔科,青岛,266109;青岛大学附属青岛市市立医院口腔医学中心,青岛,266071;青岛大学附属医院口腔颌面外科,青岛,266005;大连医科大学口腔医学院,大连,116044
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目的 通过RNA干扰技术沉默Rce1基因,探讨Rce1对舌癌细胞侵袭和迁移能力的影响.方法 体外培养舌鳞状细胞癌Cal-27和SCC-4细胞,设计合成Rce1基因的小干扰RNA(siRNA),采用脂质体载体瞬时转染沉默Rce1基因.根据转染的siRNA不同,将实验组分为Rce1-siRNA-1组、Rce1-siRNA-2组、Rce1-siRNA-3组,脂质体载体分别转染相对应序列的siRNA.脂质体转染siCON作为阴性对照组,不转染siRNA作为空白对照组.采用实时定量聚合酶链反应检测各组Rce1、RhoA以及K-Ras基因的表达,蛋白质印迹法(Western blot)检测Rce1、RhoA、K-Ras、金属基质蛋白酶(MMP)-2及MMP-9的表达,采用体外侵袭实验检测Cal-27和SCC-4的侵袭能力,细胞划痕实验检测细胞迁移能力.结果 实时定量聚合酶链反应及Western blot检测结果显示,与阴性对照组和空白对照组相比,实验组的Rce1基因及蛋白表达均下调(P0.05),MMP-2、MMP-9表达下降(P<0.05).体外侵袭实验表明,与对照组相比,实验组在聚碳酯膜上的细胞总数明显减少(P<0.05).细胞划痕实验表明,实验组划痕处细胞闭合时间明显长于对照组(P<0.05).结论体外沉默Rce1可以有效下调其在舌癌细胞Cal-27和SCC-4中的表达水平,降低迁移和侵袭能力.
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