【摘 要】
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醇脱氢酶I （Adh1p）是黄酒酵母艾利希途径最后合成β-苯乙醇的一个关键酶。为探究黄酒酵母Adh1p的差异及酶学特性，以工业生产菌株黄酒酵母HJ和模式菌株酿酒酵母S288C的基因组为模板，设计引物PCR扩增醇脱氢酶编码区基因ADH1，构建pET-28a（+）表达质粒，转化至大肠杆菌BL21 （DE3）中，IPTG诱导表达获得Adh1p。通过超声破碎菌体后获取粗酶液，亲和层析纯化后获取纯酶，进而探
【机 构】
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江南大学食品学院粮食发酵与食品生物制造国家工程研究中心
【基金项目】
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国家自然科学基金青年科学基金项目（32072205,31701593）；
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醇脱氢酶I （Adh1p）是黄酒酵母艾利希途径最后合成β-苯乙醇的一个关键酶。为探究黄酒酵母Adh1p的差异及酶学特性，以工业生产菌株黄酒酵母HJ和模式菌株酿酒酵母S288C的基因组为模板，设计引物PCR扩增醇脱氢酶编码区基因ADH1，构建pET-28a（+）表达质粒，转化至大肠杆菌BL21 （DE3）中，IPTG诱导表达获得Adh1p。通过超声破碎菌体后获取粗酶液，亲和层析纯化后获取纯酶，进而探究酶学特性。以苯乙醛为底物，酶活性测定表明：来自黄酒酵母的Adh1pHJ纯酶的酶活（231.51 U/g）比来自酿酒酵母的Adh1pS288C（203.48 U/g）高13.79%，且Adh1pHJ的Km值（0.524μmol/L）小于Adh1pS288C的Km值（0.759μmol/L），表现为Adh1pHJ与底物的亲和力更大。从kcat/Km值发现Adh1pHJ（0.406 L/（μmol·min））的催化效率更高。Adh1pHJ耐受β-苯乙醇和乙醇的能力较高于Adh1pS288C。本研究结果为Adh1p的结构以及酶学性质分析提供方法和理论依据，同时也对β-苯乙醇工业生产开发提供借鉴。
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