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摘要：为探讨溶血性黄疸的发病机制和病理学特征，为其防治提供依据。方法：经耳缘静脉注射1%盐酸苯肼，复制家兔溶血性黄疸的病理模型，检测其血常规、尿常规、血清胆红素含量，观察临床表现和肝、肾的病理变化。结果：在第3次注射盐酸苯肼后，试验兔出现贫血、黄疸、血红蛋白尿等症状，外周血液红细胞数量、血红蛋白含量和红细胞压积明显下降，有核红细胞增多，血清胆红素含量明显升高;尿胆红素、尿胆原和潜血阳性;肝细胞和肾小管上皮变性、坏死。结论：静脉注射盐酸苯肼可引起家兔溶血性黄疸、贫血和血液性缺氧。
关键词：家兔;盐酸苯肼;溶血性黄疸;病理变化
中图分类号：S829.1 文献标识码：B doi：10.3969/j.issn.2096-3637.2019.19.001
0 引言
溶血性黄疸又称肝前性黄疸，是由于红细胞大量破坏，血液中胆红素大量堆积引起相关组织黄染的病理现象，发病原因主要是免疫性溶血、异型输血及中毒等[1]。盐酸苯肼是一种工业原料，能引起严重的溶血反应，导致高胆红素血症和贫血[2]。试验通过静脉注射盐酸苯肼在家兔上复制溶血性黄疸的病理模型，并对其临床表现、血液学变化和肝、肾的病理性损害进行观察，可为进一步揭示其致病机理提供依据。
1 材料与方法
1.1 试剂与材料
盐酸苯肼（上海化学试剂厂，AR），常规手术器械，AU5800全自动生化分析仪，DxH600血细胞分析仪，IQ200自动尿液分析仪，Leica RM2125手动轮转式切片机，Olympus显微镜，采血针，抗凝管。
1.2 试验动物与分组
中国白兔10只，雌雄各半，体重约2.0kg。随机分成试验组和对照组，每组5只。试验前进行2d的适应性饲养。
1.3 方法
1.3.1 模型建立
试验组经耳缘静脉注射1%盐酸苯肼溶液（2mL/kg体重），1次/d，连续3d;对照组以生理盐水代替苯肼溶液。观察动物的心率，呼吸，精神状态，皮肤、黏膜、结膜和尿液的颜色。
1.3.2 血、尿相关指标检测
在第3次注射盐酸苯肼后第2天，采集血、尿样品，分别检测血清直接胆红素、间接胆红素、总胆红素含量、血常规和尿常规。检测结果用PASS统计软件进行t检验及方差分析。
1.3.3 病理学观察
处死动物并进行尸检，观察皮肤、结膜、内脏的颜色和肝、肾的变化。从肝、肾不同部位取材，10%中性福尔马林固定，石蜡切片、HE染色，镜检。
2 结果
2.1 临床表现
试验期间，2組家兔均未中途死亡。试验组在连续3d静注盐酸苯肼后精神沉郁，活动减少，食欲减退，心率、呼吸加快，口唇粘膜、眼结膜颜色变淡，以后呈淡黄色（见图1）;排尿次数和尿量减少，尿色变深，呈浓茶色。
2.2 血、尿检测结果
试验组在第3次注射盐酸苯肼后第2天，外周血液中红细胞数量、血红蛋白含量、红细胞压积均明显低于对照组（P<0.01）;有核红细胞绝对值和百分比均明显升高，与对照组差异极显著（P<0.01）。见表1。
试验组在第3次注射盐酸苯肼后第2天，血清总胆红素、结合胆红素和未结合胆红素含量均明显升高，与对照组相比，差异极显著（P<0.01）。见表2。
试验组在第3次注射盐酸苯肼后第2天，尿液中的尿胆原、胆红素、尿蛋均呈阳性，同时出现大量隐血。见表3。
2.3 病理变化
（1）试验组家兔尸体消瘦，被毛粗乱，眼结膜和口腔粘膜黄染;血液稀薄，不易凝固;皮下散在出血点;胸、腹腔有少量淡黄色积液，腹膜颜色灰黄，湿润，表面光滑。见图1。
（2）肝脏。略肿大，被膜紧张，边缘变钝，土黄色，呈斑驳状，质脆，切面有多量暗红色血液流出。镜检，肝小叶结构清晰，部分肝小叶中央静脉和肝窦扩张、淤血;肝细胞肿胀，弥漫性脂肪变性和散在性坏死，见图2。
（3）肾脏。轻度肿大，质软，土黄色，被膜紧张，易剥离，切面皮质略厚，皮、髓质界限清晰。镜检，肾小球充血;肾小管腔变小、形状不规则，严重者闭锁;肾小管上皮水泡变性，部分坏死崩解，少数肾小管内可见均质、红染的蛋白管型。见图3。
3 讨论与结论
（1）盐酸苯肼是一种化工原料，广泛用于染料、医药和农药的生产。因其能促进氧自由基产生，破坏红细胞膜，使血红蛋白变性，故可引起溶血性黄疸和贫血[3]。试验组家兔连续3d注射盐酸苯肼后，由于血液中的红细胞大量崩解，血常规检查可见红细胞数量、血红蛋白含量、红细胞压积均明显低于对照组;同时，由于贫血引起血液性缺氧，动物表现出精神沉郁、活动减少、心率和呼吸频率加快等症状，并通过骨髓造血机能代偿性增强，使血液中未成熟的有核红细胞增多。此外，严重溶血引起血红蛋白尿，使尿液颜色加深，并对肾脏产生毒性作用。
（2）生理情况下，动物体内胆红素主要来源于衰老死亡的红细胞。红细胞破坏后，血红素降解形成未结合胆红素，后者经肝细胞醋化处理转化为结合胆红素，随胆汁排入肠道[4]。由于盐酸苯肼引起严重溶血，使血液中未结合胆红素含量明显升高;同时由于盐酸苯肼对肝脏的损伤，部分肝细胞坏死后释放的结合胆红素进入血液，使血液中结合胆红素含量也增高，胆红素在有关组织中沉积，引起黄疸。血液中的结合胆红素能从尿中排出，使尿中胆红素均呈阳性，并进一步对肾脏造成损伤。
（3）盐酸苯肼除能引起溶血外，对实质细胞也可产生毒性作用[5]。试验组肝脏和肾脏均出现不同程度的变性和坏死，尤其是肾脏，表现为肾小管上皮广泛的水泡变性、坏死和崩解，堵塞肾小管。此外，因溶血引起的血红蛋白尿在肾小管中形成蛋白管型加重了肾脏的损伤，这也是造成尿潜血的主要原因。
参考文献
[1]马学恩，王凤龙.家畜病理学2版[M].北京：中国农业出版社，2015：214-217.
[2]章茹，吴银枝，郑典模.盐酸苯肼的合成[J].南昌大学学报（理科版），2002（4）：394-396.
[3]任德旺，叶淳渟，倪必辉，等.盐酸苯肼致小鼠化学损伤性血虚证模型的改良[J].辽宁中医药大学学报，2015，17（8）：108-110.
[4]谭洁，田霞.溶血性黄疸[J].医学新知杂志，2015，25（1）：16-18.
[5]李永富，马月兰，聂玲，等.新生猪溶血性黄疸模型的制备与验证[J].中国当代儿科杂志，2016，18（5）：66-68.
作者简介：朱凯（1997-），男，内蒙古乌拉特人，在读本科生。
通信作者：李晓明（1964-），男，甘肃甘谷人，博士，教授，甘肃农业大学动物医学院工作。
关键词：家兔;盐酸苯肼;溶血性黄疸;病理变化
中图分类号：S829.1 文献标识码：B doi：10.3969/j.issn.2096-3637.2019.19.001
0 引言
溶血性黄疸又称肝前性黄疸，是由于红细胞大量破坏，血液中胆红素大量堆积引起相关组织黄染的病理现象，发病原因主要是免疫性溶血、异型输血及中毒等[1]。盐酸苯肼是一种工业原料，能引起严重的溶血反应，导致高胆红素血症和贫血[2]。试验通过静脉注射盐酸苯肼在家兔上复制溶血性黄疸的病理模型，并对其临床表现、血液学变化和肝、肾的病理性损害进行观察，可为进一步揭示其致病机理提供依据。
1 材料与方法
1.1 试剂与材料
盐酸苯肼（上海化学试剂厂，AR），常规手术器械，AU5800全自动生化分析仪，DxH600血细胞分析仪，IQ200自动尿液分析仪，Leica RM2125手动轮转式切片机，Olympus显微镜，采血针，抗凝管。
1.2 试验动物与分组
中国白兔10只，雌雄各半，体重约2.0kg。随机分成试验组和对照组，每组5只。试验前进行2d的适应性饲养。
1.3 方法
1.3.1 模型建立
试验组经耳缘静脉注射1%盐酸苯肼溶液（2mL/kg体重），1次/d，连续3d;对照组以生理盐水代替苯肼溶液。观察动物的心率，呼吸，精神状态，皮肤、黏膜、结膜和尿液的颜色。
1.3.2 血、尿相关指标检测
在第3次注射盐酸苯肼后第2天，采集血、尿样品，分别检测血清直接胆红素、间接胆红素、总胆红素含量、血常规和尿常规。检测结果用PASS统计软件进行t检验及方差分析。
1.3.3 病理学观察
处死动物并进行尸检，观察皮肤、结膜、内脏的颜色和肝、肾的变化。从肝、肾不同部位取材，10%中性福尔马林固定，石蜡切片、HE染色，镜检。
2 结果
2.1 临床表现
试验期间，2組家兔均未中途死亡。试验组在连续3d静注盐酸苯肼后精神沉郁，活动减少，食欲减退，心率、呼吸加快，口唇粘膜、眼结膜颜色变淡，以后呈淡黄色（见图1）;排尿次数和尿量减少，尿色变深，呈浓茶色。
2.2 血、尿检测结果
试验组在第3次注射盐酸苯肼后第2天，外周血液中红细胞数量、血红蛋白含量、红细胞压积均明显低于对照组（P<0.01）;有核红细胞绝对值和百分比均明显升高，与对照组差异极显著（P<0.01）。见表1。
试验组在第3次注射盐酸苯肼后第2天，血清总胆红素、结合胆红素和未结合胆红素含量均明显升高，与对照组相比，差异极显著（P<0.01）。见表2。
试验组在第3次注射盐酸苯肼后第2天，尿液中的尿胆原、胆红素、尿蛋均呈阳性，同时出现大量隐血。见表3。
2.3 病理变化
（1）试验组家兔尸体消瘦，被毛粗乱，眼结膜和口腔粘膜黄染;血液稀薄，不易凝固;皮下散在出血点;胸、腹腔有少量淡黄色积液，腹膜颜色灰黄，湿润，表面光滑。见图1。
（2）肝脏。略肿大，被膜紧张，边缘变钝，土黄色，呈斑驳状，质脆，切面有多量暗红色血液流出。镜检，肝小叶结构清晰，部分肝小叶中央静脉和肝窦扩张、淤血;肝细胞肿胀，弥漫性脂肪变性和散在性坏死，见图2。
（3）肾脏。轻度肿大，质软，土黄色，被膜紧张，易剥离，切面皮质略厚，皮、髓质界限清晰。镜检，肾小球充血;肾小管腔变小、形状不规则，严重者闭锁;肾小管上皮水泡变性，部分坏死崩解，少数肾小管内可见均质、红染的蛋白管型。见图3。
3 讨论与结论
（1）盐酸苯肼是一种化工原料，广泛用于染料、医药和农药的生产。因其能促进氧自由基产生，破坏红细胞膜，使血红蛋白变性，故可引起溶血性黄疸和贫血[3]。试验组家兔连续3d注射盐酸苯肼后，由于血液中的红细胞大量崩解，血常规检查可见红细胞数量、血红蛋白含量、红细胞压积均明显低于对照组;同时，由于贫血引起血液性缺氧，动物表现出精神沉郁、活动减少、心率和呼吸频率加快等症状，并通过骨髓造血机能代偿性增强，使血液中未成熟的有核红细胞增多。此外，严重溶血引起血红蛋白尿，使尿液颜色加深，并对肾脏产生毒性作用。
（2）生理情况下，动物体内胆红素主要来源于衰老死亡的红细胞。红细胞破坏后，血红素降解形成未结合胆红素，后者经肝细胞醋化处理转化为结合胆红素，随胆汁排入肠道[4]。由于盐酸苯肼引起严重溶血，使血液中未结合胆红素含量明显升高;同时由于盐酸苯肼对肝脏的损伤，部分肝细胞坏死后释放的结合胆红素进入血液，使血液中结合胆红素含量也增高，胆红素在有关组织中沉积，引起黄疸。血液中的结合胆红素能从尿中排出，使尿中胆红素均呈阳性，并进一步对肾脏造成损伤。
（3）盐酸苯肼除能引起溶血外，对实质细胞也可产生毒性作用[5]。试验组肝脏和肾脏均出现不同程度的变性和坏死，尤其是肾脏，表现为肾小管上皮广泛的水泡变性、坏死和崩解，堵塞肾小管。此外，因溶血引起的血红蛋白尿在肾小管中形成蛋白管型加重了肾脏的损伤，这也是造成尿潜血的主要原因。
参考文献
[1]马学恩，王凤龙.家畜病理学2版[M].北京：中国农业出版社，2015：214-217.
[2]章茹，吴银枝，郑典模.盐酸苯肼的合成[J].南昌大学学报（理科版），2002（4）：394-396.
[3]任德旺，叶淳渟，倪必辉，等.盐酸苯肼致小鼠化学损伤性血虚证模型的改良[J].辽宁中医药大学学报，2015，17（8）：108-110.
[4]谭洁，田霞.溶血性黄疸[J].医学新知杂志，2015，25（1）：16-18.
[5]李永富，马月兰，聂玲，等.新生猪溶血性黄疸模型的制备与验证[J].中国当代儿科杂志，2016，18（5）：66-68.
作者简介：朱凯（1997-），男，内蒙古乌拉特人，在读本科生。
通信作者：李晓明（1964-），男，甘肃甘谷人，博士，教授，甘肃农业大学动物医学院工作。