低渗联合冻干改良制备组织工程神经支架及其性能研究

来源 :中华创伤骨科杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:nuclear01
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目的 探讨低渗联合冻干技术改良制备脱细胞周围神经支架的可行性. 方法 将剥离神经周围结缔组织的坐骨神经分为3组(n=12):未处理组:正常新鲜神经未做任何处理;传统组:传统Hudson法制备脱细胞神经支架;改良组:低渗联合冻干技术制备改良脱细胞神经支架.对以上3组行组织学、扫描电镜、孔隙率及孔隙直径测定、生物力学评估;噻唑蓝法(MTT)分析改良支架浸提液毒性;分离兔脂肪干细胞(ADSCs)种植到改良支架上,用苏木精-伊红(HE)染色、Live/Dead染色观察细胞在支架上生长、存活情况. 结果 与未处理组和传统组比较,改良组神经蓝染细胞核消失,仅见呈波浪状排列的雪旺细胞基底膜,结构较疏松.各组层黏连蛋白免疫荧光染色均为阳性.与未处理组比较,传统组与改良组脱细胞神经支架髓鞘、轴突及细胞等结构均消失,纵切面上均可见平行排列的基底膜管,但改良组相对传统组而言组织结构较为疏松.改良组脱细胞神经支架的孔隙率(49.34%±9.76%)及孔隙直径(17.61 ±3.69) μm较传统组[34.50% ±7.26%、(11.96±3.10) μm]明显增大,差异均有统计学意义(P<0.05).3组神经间生物力学性能(极限载荷、韧度、极限应力、极限应变、弹性模量及断裂功耗)比较差异均无统计学意义(P>0.05).MTT法显示不同浓度支架浸提液与对照培养液对细胞增殖影响差异均无统计学意义(P>0.05).HE染色及Live/Dead染色显示细胞在改良支架上存活及生长情况良好. 结论 低渗联合冻干技术改良制备的脱细胞神经支架具有良好的孔隙率、孔隙直径及生物力学特性,无毒,细胞相容性良好,可作为一种更有利于细胞复合的神经支架材料。

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