【摘 要】
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旨在探讨原核表达纯化的山羊α干扰素（IFN-α）对山羊副流感病毒3型（CPIV3）的抗病毒活性。通过分析山羊IFN-α的序列特点，比对不同种属IFN-α的同源性，进而构建山羊IFN-α成熟蛋白编码基因（去除信号肽基因序列）的原核表达载体pET-30a-gIFN-α,将其转化至感受态细胞Rosetta （DE3）,IPTG诱导后镍柱及亲和纯化获得山羊IFN-α。利用RT-qPCR测定山羊IFN-α作
【机 构】
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江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室
【基金项目】
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江苏省自然科学基金（BK20190272）； 国家自然科学基金（31902269）；
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旨在探讨原核表达纯化的山羊α干扰素（IFN-α）对山羊副流感病毒3型（CPIV3）的抗病毒活性。通过分析山羊IFN-α的序列特点，比对不同种属IFN-α的同源性，进而构建山羊IFN-α成熟蛋白编码基因（去除信号肽基因序列）的原核表达载体pET-30a-gIFN-α,将其转化至感受态细胞Rosetta （DE3）,IPTG诱导后镍柱及亲和纯化获得山羊IFN-α。利用RT-qPCR测定山羊IFN-α作用于牛肾细胞（Madin-Darby bovine kidney cell, MDBK cell）后6种干扰素刺激基因（interferon-stimulated genes, ISGs）的相对表达水平；同时，利用TCID50及Western blot测定其对CPIV3的抗病毒活性。结果表明，原核表达的山羊IFN-α蛋白含量为0.20 mg·mL-1,Western blot结果表明表达产物相对分子质量约为20 ku,与预期结果相符。RT-qPCR结果显示，山羊IFN-α孵育MDBK细胞后，可显著刺激RSAD2、STAT1及ISG15等6种ISGs基因的转录上调。与对照组细胞相比，山羊IFN-α显著下调MDBK细胞中CPIV3的病毒滴度，Western blot结果显示，山羊IFN-α孵育显著下调CPIV3非结构蛋白C的表达水平。山羊IFN-α对CPIV3在MDBK细胞中的增殖具有显著抑制作用。本研究扩展了I型干扰素的研究范围，为CPIV3等反刍动物疫病的防控提供新的思路。
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