草鱼垂体生长激素分离纯化及其抗体制备的研究

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应用碱性抽提、亲和层析、凝胶过滤和离子交换层析等技术从草鱼垂体中分离提纯出纯度高的 草鱼生长激素(gcGH)。用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测表明草鱼GH与大马哈鱼GH抗血清 具有明显的免疫交叉反应,而与大马哈鱼催乳素(PRL)抗血清没有交叉反应,聚丙烯酰胺凝胶电 泳表明草鱼 GH为单一蛋白带,其分子量约为22500道尔顿;等电聚焦揭示出草鱼 GH主要由等电 点为4.7和5.0的两条蛋白带组成。用纯化的草鱼GH制备了其特异的兔抗血清。在ELISA测定中, 该抗血清与大马哈鱼GtH及牛GH完全没有交叉反应,而与大马哈鱼GH只有当其浓度高达2ug/ ml时,才有微弱的交叉反应.草鱼 GH抗血清的效价确定为1: 40000左右。应用草鱼 GH及其抗血清 建立了酶标受体测定法(ELISA-RA)并检测了草鱼GH的生物活性。结果表明,草鱼GH具有与草 鱼肝细胞GH受体特异结合的生物活性。免疫细胞化学研究表明草鱼GH抗血清只与草鱼垂体间 叶(PPD)的生长激素分泌细胞特异结合,而与前叶(RPD)及后叶(PI)细胞均无染色反应。
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