【摘 要】
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本试验是用粘末端连接法把卡那霉素抗性基因(Kan~r)插入到大豆根瘤菌B.j110的苹果酸脱氢酶(mdh)基因中,使mdh基因失活。首先,通过EcoRI切点把Kan~r连接到pTZ18U载体上,经转化
【机 构】
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哈尔滨师范大学生物系,美国密苏里—哥伦比亚大学生化系
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本试验是用粘末端连接法把卡那霉素抗性基因(Kan~r)插入到大豆根瘤菌B.j110的苹果酸脱氢酶(mdh)基因中,使mdh基因失活。首先,通过EcoRI切点把Kan~r连接到pTZ18U载体上,经转化把这一重组DNA转入大肠杆菌XLI-Blue中,利用含有氨苄青霉素和卡那霉素的选择培养基选出转化菌株,提取pTZ18U-Kan~r质粒DNA;然后,用Sall分别切已克隆在pTZ19U中的B.j110mdh基因及pTZ18u-Kan~r,经粘末端连接把卡那霉素抗性基因连接到苹果酸脱氢酶基因中间,从而使其失活。
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