评价氢气对高糖诱导大鼠雪旺细胞氧化应激损伤的影响及其与多聚ADP核糖聚合酶-1(PARP-1)依赖性细胞死亡(parthanatos)的关系。
方法原代大鼠雪旺细胞培养于RSM培养基,制备单细胞悬液,分别接种于96孔板(1×104/ml,200 μl/孔)或6孔板(1×106/ml,2 ml/孔)。采用随机数字表法,将其分为5组(n=30):对照组(C组)、氢气组(H2组)、高糖组(HG组)、高糖+氢气组(HG+H2组)、高渗对照组(M组)。C组、HG组和M组用正常培养基培养;H2组和HG+H2组用饱和富氢培养基培养。其中HG组和HG+H2组分别加入葡萄糖50 mmol/L;C组和H2组加入等容量生理盐水;M组加入甘露醇44.4 mmol/L。分别孵育48 h后,应用CCK-8法测定细胞活力;DCFH-DA实验检测细胞内活性氧(ROS)水平;ELISA法检测8-羟脱氧鸟苷(8-OHdG)的浓度;Western blot法检测PARP-1、裂解PARP-1(cleaved-PARP-1)、多聚ADP核糖(PAR)、凋亡诱导因子(AIF)总蛋白及核蛋白表达水平。计算PARP-1活性(cleaved-PARP-1/PARP-1)和AIF核转位情况(AIF核蛋白/AIF总蛋白)。
结果与C组和H2组比较,HG组和HG+H2组细胞活力降低,PARP-1活性、ROS、8-OhdG、PAR表达水平升高,AIF核转位增多(P<0.05);与HG组比较,HG+H2组细胞活力升高,PARP-1活性、ROS、8-OhdG、PAR表达水平降低,AIF核转位减少(P<0.05);C组与M组各指标比较差异无统计学意义(P>0.05)。
结论氢气可减轻高糖诱导大鼠雪旺细胞氧化应激损伤,其机制与抑制parthanatos有关。