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[摘要] 目的 探讨细胞角蛋白CK19 mRNA表达水平在乳腺癌微转移检测及治疗监测中的应用。方法 选择我院2004年2月~2011年8月健康体检者30例作为对照组,同时选择良性乳腺肿瘤30例,乳腺癌30例,对健康体检者、30例良性乳腺肿瘤和30例乳腺癌患者进行外周血中CK19 mRNA水平检查,统计比较组间的差异。结果 CK19 mRNA在乳腺癌组表达明显高于良性乳腺疾病组,乳腺癌淋巴结转移组明显高于无淋巴结转移组,差异均有统计学意义(P < 0.05)。结论 FQ-PCR检测CK19 mRNA对乳腺癌诊断特异性较高,具有确切的预测价值,可有效监测乳腺癌微转移和疗效,临床值得推广。
[关键词] 乳腺癌微转移;CK19 mRNA;预测
[中图分类号] R737.9 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701(2012)21-0022-02
CK19作为上皮组织来源的组织特异性指标,近年来研究发现CK19的异常表达与乳腺癌的微转移及其疗效具有密切关系[1-3]。FQ-PCR可以进行核酸定量分析,灵敏性高、特异性高,具有同时进行扩增和检测的双重优势,诊断乳腺癌微转移具有一定的临床应用价值,引起人们的广泛关注。选择我院2004年2月~2011年8月健康体检者30例作为对照组,同时选择良性乳腺肿瘤患者30例,乳腺癌患者30例,对健康体检者、30例良性乳腺肿瘤患者和30例乳腺癌患者进行外周血中CK19 mRNA水平检查,统计比较组之间的差异,现总结报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选择我院2004年2月~2011年8月健康体检者30例作为对照组,同时选择良性乳腺肿瘤患者30例,乳腺癌患者30例,对健康体检者、30例良性乳腺肿瘤患者和30例乳腺癌患者进行外周血中CK19 mRNA水平检查,统计比较组间的差别。入选者均心、肺、肝、肾等功能健全;30例乳腺癌患者均经病理确诊。两组间患者年龄比较差异无统计学意义(P > 0.05),具有可比性。
1.2方法
术前1周内取晨血5 mL,为抗凝加少量的EDTA(1 mg/mL),生理盐水稀释2倍,借助淋巴细胞分离液将淋巴细胞分离完全,提取细胞总RNA[3]。并设计CK19的引物和探针。逆转录反应体系50 μL,在分析仪上对标本、阳性对照、阴性对照和标准品进行扩增和分析。采用Bieche的标准曲线制备方法,线性范围:(1 022~1 066)/mL。仪器根据标准曲线自动计算出标本中CK19的拷贝数/ mL,定量分析GAPDH的拷贝数/mL,CK19/GAPDH比值。
1.3统计学方法
数据使用SPSS17.0统计学软件,多组间计量资料比较采用方差分析,两两比较进行t检验,计数资料采用卡方检验,P < 0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1对照组与疾病组CK19测定结果
表1可见,CK19在乳腺癌组明显高于良性乳腺疾病组(P < 0.05);CK19/GAPDH在乳腺癌组明显高于良性乳腺疾病组(P < 0.05);GAPDH组间差异不明显。
表1 对照组与疾病组CK19测定结果(x±s)
注:乳腺癌组与良性乳腺疾病组比较具有统计学意义(▲P <0.05)
2.2比较FQ-PCR和RT-PCR用于乳腺癌微转移诊断的评价
我们比较了RT-PCR法和FQ-PCR两种方法检测乳腺癌灵敏度,表明FQ-PCR对乳腺癌诊断的灵敏度、特异性显著高于RT-PCR法(P < 0.05)。见表2。
表2 两种方法对乳腺癌灵敏度、特异性比较
注:两组比较具有统计学意义(▲P <0.05)
3 讨论
近年来分子生物学广泛应用,现代医学认为角蛋白19是一种酸性蛋白[4-6]。CK19在正常上皮和各种上皮来源的肿瘤中,均会有表达,但是在正常情况下,外周血、骨髓、淋巴结内不会表达。CK19在甲状腺癌、肝胆管细胞癌、肝细胞癌、非小细胞肺癌、肺鳞状细胞癌等均有不同程度的表达,特别是在肺鳞状细胞癌中的诊断、监测、预后起重要作用。如果外周血中检测发现有CK19 mRNA,表明肿瘤细胞已经进入血液,说明肿瘤转移。目前在临床上已肯定CK19 mRNA表达水平在乳腺癌诊断及治疗监测中的应用价值[7,8]。
本研究结果显示,CK19在乳腺癌组明显高于良性乳腺疾病组,CK19/GAPDH在乳腺癌组明显高于良性乳腺疾病组(P < 0.05),GAPDH组间差异没有明显差异(P > 0.05);表明CK19 mRNA表达水平明显减弱。我们比较了RT-PCR法和FQ-PCR两种方法检测结果,表明FQ-PCR对乳腺癌诊断的灵敏度显著高于RT-PCR法。
综上所述,CK19的基因表达水平可有效监测乳腺癌微转移和疗效,FQ-PCR法不仅具有普通PCR的高灵敏性,而且由于荧光探针的作用,可以获得定量的结果,所以FQ-PCR还具有DNA杂交的高特异性和光谱技术的高精确性,结果更加可靠,检验更加方便。可以有效地用于乳腺癌检测。健康人与乳腺癌微转移患者之间CK19的基因表达水平具有明显差异;同时,外周血CK19 mRNA的表达水平,为临床判断乳腺癌血行转移的高危险因素的患者提供参考指标,也为患者的个体化治疗提供依据。我们认为CK19 mRNA表达水平对预测乳腺癌微转移具有重要价值,值得推广应用。
[参考文献]
[1] Kao T J,Isaacson D,Newell J C,et al. A 3D reconstruction algorithm for EIT using a handheld probe for breast cancer detection[J]. Physiological Measurement,2006,27(5):1-11. [2] 沈坤炜,Nirmal Lamichhane,韩企夏,等. 乳腺癌前哨淋巴结活检[J]. 中华外科杂志,2002,40(5):247-350.
[3] Oh TI,Lee J,Seo JK,et al. Feasibility of breast cancer lesion detection using a multi-frequency trans-admittance scanner(TAS) with 10 Hz to 500 kHz bandwidth[J]. Physiological Measurement,2007,28(7):71-84.
[4] 付峰,董秀珍,刘锐岗,等. 乳腺电阻抗投影成像算法及实现[J]. 中国生物医学工程学报,2008,27(5):659-662.
[5] 徐昊,陈创,刘春梅,等. 阿达玛变换光谱显微成像分析乳腺癌组织肿瘤标志物的分布[J]. 光谱学与光谱分析,2009,29(12):3217-3219.
[6] 王侃,董秀珍,付峰,等. 基于电阻抗扫描的乳腺组织阻抗频谱特性测量实验[J]. 生物物理学报,2008,24(6):474-480.
[7] Ironstone J,Graovac M,Martens J,et al. Novel lead configurations for robust bio·impedanceacquisition[C]. Proceedings of the 29th Annual International Conference of the 1EEE EMBS[J]. Lyon,France,2007:2764-2767.
[8] Stojadinovic A,Nissan A,Gallimidi Z,et al. Electricalimpedance scanning for the early detection of breastcancer in young women:preliminary results of a multicenter prospective clinical trial[J]. Journal of Clinical Oncology,2005,23(12):2703-2715.
(收稿日期:2012-05-14)
[关键词] 乳腺癌微转移;CK19 mRNA;预测
[中图分类号] R737.9 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701(2012)21-0022-02
CK19作为上皮组织来源的组织特异性指标,近年来研究发现CK19的异常表达与乳腺癌的微转移及其疗效具有密切关系[1-3]。FQ-PCR可以进行核酸定量分析,灵敏性高、特异性高,具有同时进行扩增和检测的双重优势,诊断乳腺癌微转移具有一定的临床应用价值,引起人们的广泛关注。选择我院2004年2月~2011年8月健康体检者30例作为对照组,同时选择良性乳腺肿瘤患者30例,乳腺癌患者30例,对健康体检者、30例良性乳腺肿瘤患者和30例乳腺癌患者进行外周血中CK19 mRNA水平检查,统计比较组之间的差异,现总结报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选择我院2004年2月~2011年8月健康体检者30例作为对照组,同时选择良性乳腺肿瘤患者30例,乳腺癌患者30例,对健康体检者、30例良性乳腺肿瘤患者和30例乳腺癌患者进行外周血中CK19 mRNA水平检查,统计比较组间的差别。入选者均心、肺、肝、肾等功能健全;30例乳腺癌患者均经病理确诊。两组间患者年龄比较差异无统计学意义(P > 0.05),具有可比性。
1.2方法
术前1周内取晨血5 mL,为抗凝加少量的EDTA(1 mg/mL),生理盐水稀释2倍,借助淋巴细胞分离液将淋巴细胞分离完全,提取细胞总RNA[3]。并设计CK19的引物和探针。逆转录反应体系50 μL,在分析仪上对标本、阳性对照、阴性对照和标准品进行扩增和分析。采用Bieche的标准曲线制备方法,线性范围:(1 022~1 066)/mL。仪器根据标准曲线自动计算出标本中CK19的拷贝数/ mL,定量分析GAPDH的拷贝数/mL,CK19/GAPDH比值。
1.3统计学方法
数据使用SPSS17.0统计学软件,多组间计量资料比较采用方差分析,两两比较进行t检验,计数资料采用卡方检验,P < 0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1对照组与疾病组CK19测定结果
表1可见,CK19在乳腺癌组明显高于良性乳腺疾病组(P < 0.05);CK19/GAPDH在乳腺癌组明显高于良性乳腺疾病组(P < 0.05);GAPDH组间差异不明显。
表1 对照组与疾病组CK19测定结果(x±s)
注:乳腺癌组与良性乳腺疾病组比较具有统计学意义(▲P <0.05)
2.2比较FQ-PCR和RT-PCR用于乳腺癌微转移诊断的评价
我们比较了RT-PCR法和FQ-PCR两种方法检测乳腺癌灵敏度,表明FQ-PCR对乳腺癌诊断的灵敏度、特异性显著高于RT-PCR法(P < 0.05)。见表2。
表2 两种方法对乳腺癌灵敏度、特异性比较
注:两组比较具有统计学意义(▲P <0.05)
3 讨论
近年来分子生物学广泛应用,现代医学认为角蛋白19是一种酸性蛋白[4-6]。CK19在正常上皮和各种上皮来源的肿瘤中,均会有表达,但是在正常情况下,外周血、骨髓、淋巴结内不会表达。CK19在甲状腺癌、肝胆管细胞癌、肝细胞癌、非小细胞肺癌、肺鳞状细胞癌等均有不同程度的表达,特别是在肺鳞状细胞癌中的诊断、监测、预后起重要作用。如果外周血中检测发现有CK19 mRNA,表明肿瘤细胞已经进入血液,说明肿瘤转移。目前在临床上已肯定CK19 mRNA表达水平在乳腺癌诊断及治疗监测中的应用价值[7,8]。
本研究结果显示,CK19在乳腺癌组明显高于良性乳腺疾病组,CK19/GAPDH在乳腺癌组明显高于良性乳腺疾病组(P < 0.05),GAPDH组间差异没有明显差异(P > 0.05);表明CK19 mRNA表达水平明显减弱。我们比较了RT-PCR法和FQ-PCR两种方法检测结果,表明FQ-PCR对乳腺癌诊断的灵敏度显著高于RT-PCR法。
综上所述,CK19的基因表达水平可有效监测乳腺癌微转移和疗效,FQ-PCR法不仅具有普通PCR的高灵敏性,而且由于荧光探针的作用,可以获得定量的结果,所以FQ-PCR还具有DNA杂交的高特异性和光谱技术的高精确性,结果更加可靠,检验更加方便。可以有效地用于乳腺癌检测。健康人与乳腺癌微转移患者之间CK19的基因表达水平具有明显差异;同时,外周血CK19 mRNA的表达水平,为临床判断乳腺癌血行转移的高危险因素的患者提供参考指标,也为患者的个体化治疗提供依据。我们认为CK19 mRNA表达水平对预测乳腺癌微转移具有重要价值,值得推广应用。
[参考文献]
[1] Kao T J,Isaacson D,Newell J C,et al. A 3D reconstruction algorithm for EIT using a handheld probe for breast cancer detection[J]. Physiological Measurement,2006,27(5):1-11. [2] 沈坤炜,Nirmal Lamichhane,韩企夏,等. 乳腺癌前哨淋巴结活检[J]. 中华外科杂志,2002,40(5):247-350.
[3] Oh TI,Lee J,Seo JK,et al. Feasibility of breast cancer lesion detection using a multi-frequency trans-admittance scanner(TAS) with 10 Hz to 500 kHz bandwidth[J]. Physiological Measurement,2007,28(7):71-84.
[4] 付峰,董秀珍,刘锐岗,等. 乳腺电阻抗投影成像算法及实现[J]. 中国生物医学工程学报,2008,27(5):659-662.
[5] 徐昊,陈创,刘春梅,等. 阿达玛变换光谱显微成像分析乳腺癌组织肿瘤标志物的分布[J]. 光谱学与光谱分析,2009,29(12):3217-3219.
[6] 王侃,董秀珍,付峰,等. 基于电阻抗扫描的乳腺组织阻抗频谱特性测量实验[J]. 生物物理学报,2008,24(6):474-480.
[7] Ironstone J,Graovac M,Martens J,et al. Novel lead configurations for robust bio·impedanceacquisition[C]. Proceedings of the 29th Annual International Conference of the 1EEE EMBS[J]. Lyon,France,2007:2764-2767.
[8] Stojadinovic A,Nissan A,Gallimidi Z,et al. Electricalimpedance scanning for the early detection of breastcancer in young women:preliminary results of a multicenter prospective clinical trial[J]. Journal of Clinical Oncology,2005,23(12):2703-2715.
(收稿日期:2012-05-14)