【摘 要】
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将已经突变了稀有密码子的人IL-2 (Ala125)基因,与GD2单链抗体基因通过over-lap-PCR法,构建成ScFv-IL-2融合基因,并在基因的C端引入his tag序列. ScFv-IL-2基因经测序正确后
【机 构】
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中国科学院,Beckman Research Institute,广西大学
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将已经突变了稀有密码子的人IL-2 (Ala125)基因,与GD2单链抗体基因通过over-lap-PCR法,构建成ScFv-IL-2融合基因,并在基因的C端引入his tag序列. ScFv-IL-2基因经测序正确后连接到表达载体pSE380上,然后导入大肠杆菌BL21中表达.表达蛋白为包涵体,表达量占总蛋白的30%以上,经SDS-PAGE及Western blot鉴定表达蛋白的分子量为43 kD,与预期的相符.包涵体粗提后,经Ni2+亲和层析柱及Sephacryl S-200HR柱分离复性,纯度可达90%以上,ELISA试验结果证明该融合蛋白保存了与相应抗原的结合活性和IL-2的生物活性.
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