【摘 要】
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目的 观察Toll样受体4(TLR4)及IL-6、TNF-α在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)中的变化,探讨TLR4在高血压肾损害中的作用机制.方法 NRK-52E按AngⅡ浓
【机 构】
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中南大学湘雅医院肾内科,解放军第一六三医院空勤科
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目的 观察Toll样受体4(TLR4)及IL-6、TNF-α在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)中的变化,探讨TLR4在高血压肾损害中的作用机制.方法 NRK-52E按AngⅡ浓度梯度(10-6～10-10M)培养24 h以确定最佳干预浓度,按时间梯度(6～48 h)分组培养选择最佳干预时间,均设正常对照组;同时建立稳定转染TLR4 RNA干扰(RNAi)质粒Si525、Si526的NRK-52E细胞株.逆转录.多聚酶链反应(RT-PCR)及Western Blot检测TLR4表达水平,酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清中的IL-6、TNF-α仅分泌水平.结果 10-6～10-9 M AngⅡ均可诱导NRK-52E中的TLR4 mRNA明显上调(P＜0.05);10-7MAngⅡ作用NRK-52E 6 h即可见TLR4 mRNA表达增高,高峰维持12～24 h(P＜0.05);10-7M AngⅡ作用NRK-52E 24 h后可显著刺激其上清中的IL-6、TNF-α分泌增多(P＜0.01).TLR4 RNAi后NRK-52E中的TLR4 mRNA及蛋白表达水平均被不同程度抑制(P＜0.01或P＜0.05),其中Si526基因沉默效应较Si525强(P＜0.05).10-7M AngⅡ作用稳定转染Si526的NRK-52E 24 h后,其上清中的IL-6、TNF-α分泌水平与作用于正常NRK-52E比较明显降低(P＜0.05).结论 AngⅡ可刺激NRK-52E中TLR4及IL-6、TNF-α的表达,阻断TLR4可抑制IL-6、TNF-α等炎症因子的表达,提示TLR4与下游炎症因子存在密切关系,可能是高血压肾损害中存在微炎症反应的作用机制之一.
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