【摘 要】
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构建并鉴定了针对绵羊抑制素α亚基(INHA)基因的shRNA(Small hairpin RNA,shRNA)慢病毒干扰载体,为进一步制备优质、高产转基因绵羊奠定基础。设计并合成4条针对绵羊INHA基因
【基金项目】
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转基因生物新品种培育科技重大专项(2009ZX08008-004B2008ZX08008-003);中国农业科学院创新基金项目(2004-院-1);中国农业科学院优秀科技创新团队资助
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构建并鉴定了针对绵羊抑制素α亚基(INHA)基因的shRNA(Small hairpin RNA,shRNA)慢病毒干扰载体,为进一步制备优质、高产转基因绵羊奠定基础。设计并合成4条针对绵羊INHA基因的shRNA表达序列(shRNA1、shRNA2、shRNA3、shRNA4)及2条阴性对照序列(NC1、NC2),将其分别连接到空载体pGFP-V-RS中,得到4个shRNA表达载体(即shRNA干扰载体)pGFP-V-RS-shRNA和2个阴性对照载体pGFP-V-RS-NC;同时构建绵羊INHA的高效表达载体pIRES2-eGFP-INHA,然后将构建好的4个shRNA干扰载体及2个阴性对照载体分别与INHA高效表达载体瞬时共转染293T细胞,qPCR法进行干扰效果筛选,挑选干扰效果最佳的shRNA干扰载体构建成慢病毒干扰载体。qPCR检测结果表明,shRNA干扰载体pGFP-V-RS-shRNA3的干扰效果最好,用它构建的慢病毒干扰载体经测序验证表明其已建成功。绵羊INHA shRNA慢病毒干扰载体构建成功,为进一步制备优质高繁转基因绵羊奠定了基础。
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